ГОСТ 33641-2015
7 Описание метода
7.1 Испытуемые сосуды и камеры для культивирования
Л
ичинки подвергают воздействию испытуемого вещества в стеклянных стаканах вместимостью
600 мл с диаметром 8 см. При обеспечении соответствующей высоты слоя надосадочной воды иосадка
пригодны и другие сосуды. Поверхность осадка должна быть достаточной для обеспечения 2-3 см2 на
личинку. Соотношение высоты слоя осадка к высоте надосадочной воды должно составлять 1:4.
Используют камеры для культивирования (размером не менее 30 см в трех измерениях) с марлей
(размер отверстий должен быть примерно равен 1 мм) сверху и с одной стороны камеры (см. прило
жение Г). В каждую камеру для кладки яиц помещают кристаллизационную чашку вместимостью 2 л,
содержащую испытуемую воду и осадок. Для кристаллизационной чашки соотношение высоты слоя
осадка к высоте надосадочной жидкости также должно составлять примерно 1:4.
После сбора тяжей яиц в кристаллизационной чашке их помещают в 12-луночный микротитрацион-
ный планшет (один тяж на лунку, содержащую не менее 2.5 мл воды из «обогащенной» кристаллизацион
ной чашки), после чего планшеты покрывают крышкой для предупреждения интенсивного испарения.
Также можно использовать другие сосуды, подходящие для хранения тяжей яиц.
За исключением микротитрационных планшетов все испытуемые сосуды и другое оборудование,
контактирующее с тест-системой, должны быть изготовлены полностью из стекла или другого химиче
ски инертного материала (например, тефлона).
7.2 Выбор вида хирономид
Предпочтительным видом для использования в испытании является Chironomus riparius. Также
может использоваться С. yoshimatsui. С. dilutus также является подходящим, но с ним труднее рабо
тать и требуется более длительный период испытания. Подробное описание методов культивирования
Chironomus riparius приводится в приложении А. Также имеется информация об условиях культивиро
вания для других видов, то есть С. dilutus [6] и С. yoshimatsui [15]. Перед началом испытания прово дят
идентификацию вида, но это не требуется для каждого испытания, если организмы происходят из
внутрилабораторной культуры.
7.3 Осадок
7.3.1 Рекомендуется использовать искусственный осадок (осадок, также называемый реконстру
ированным, составленным или синтетическим). Если используется природный осадок, то его следует
охарактеризовать (определить pH. содержание органического углерода, а также рекомендуются такие
параметры, как соотношение C/N и гранулометрия), и он не должен содержать каких-либо загрязнений и
других организмов, конкурирующих с хирономидами или питающихся ими. Также перед использова
нием в испытании токсичности для хирономид природный осадок кондиционируют в точение 7 сут в тех
же условиях, в которых будет проводиться последующее испытание. Рекомендуется согласно [1]. [20].
[21] применение следующего искусственного осадка, как описано в [1]:
а) 4 % — 5 % (сухая масса) торфа: pH как можно ближе к 5.5-6.0; следует использовать торф
в виде измельченного порошка с размером частиц не менее 1 мм. высушенного только на воздухе;
б) 20 % (сухая масса) каолиновой глины (содержание каолинита предпочтительно более 30 %);
в) 75 % — 76 % (сухая масса) кварцевого песка (должен преобладать мелкий песок с более чем
50 % частиц размером в пределах от 50 до 200 мкм);
г) деионизированная вода добавляется для обеспечения влажности конечной смеси в пределах
30 % — 50 %;
д) химически чистый карбонат кальция (СаСОэ) добавляется для доведения pH конечной смеси
осадка до 7.Q-0.5;
е) содержание органического углерода конечной смеси должно составлять 2 %
±
0.5 % и дово
диться соответствующими количествами торфа и песка согласно перечислениям а) и в).
7.3.2 Необходимо иметь информацию об источнике торфа, каолиновой глины и песка. Компоненты
осадка исследуют на отсутствие химического загрязнения (например, тяжелыми металлами, хлороргани-
ческими соединениями, фосфорорганическими соединениями и т. п.). Пример получения искусственного
осадка описан в приложении Б. Также можно смешать составляющие компоненты в сухом виде, если
было показано, что после добавления надосадочной воды не происходит разделения компонентов (на
пример. всплытия частиц торфа), и что торф или осадок были достаточно кондиционированы.
3