ГОСТ 33641-2015
9.1.5 Сбор вылупившихся взрослых особей
9.1.5.1 Вылупившихся комаров 1-го поколения собирают не менее одного раза, но предпочти
тельно два раза в сутки (см. 9.2.1.2) из испытуемых сосудов с использованием аспиратора или анало
гичного устройства (см. приложение Г). Следует соблюдать особую осторожность, чтобы не повредить
взрослых особей. Собранных комаров из четырех испытуемых сосудов в одной обработке переносят в
камеру для культивирования, которая заранее была для них приготовлена. В день первого вылупления
(самцов) в кристаллизационные чашки пипеткой вносят небольшой объем стокового раствора испытуе
мого вещества ниже поверхности воды (дизайн с обогащенной водой). Затем надосадочную воду осто
рожно перемешивают, чтобы не нарушить осадок. Номинально концентрация испытуемого вещества
в кристаллизационных чашках является такой же, как и в обработанных сосудах, которые относятся к
данной камере для культивирования. Для дизайна с обогащенным осадком кристаллизационные чашки
готовят примерно на 11 сут после начала воздействия (т. е. внесения 1-го поколения личинок) таким
образом, чтобы они могли уравновеситься в течение примерно 48 ч до образования первых тяжей яиц.
9.1.5.2 Тяжи яиц собирают из кристаллизационной чашки, находящейся в камере для культивиро вания.
с использованием пинцета или пипетки с тупым кончиком. Каждый тяж яиц помещают в сосуд с
культуральной средой из кристаллизационной чашки, из которой его отобрали (например, лунку 12-лу-
ночного микропланшета не менее чем с 2,5 мл среды). Сосуды с тяжами яиц покрывают крышкой для
предупреждения значительного испарения. Проводят наблюдение за тяжами яиц в течение не менее 6 сут
после их образования для того, чтобы отнести к фертильным или нефертильным.
Для получения ранней стадии 2-го поколения личинок отбирают не менее трех, а предпочтитель
но шесть тяжей фертильных яиц из каждой камеры для культивирования и в присутствии небольшого
количества корма, что обеспечивает вылупление. Данные тяжи яиц получены на пике кладки яиц. что
обычно имеет место примерно на 19 сут испытаний в контроле. Теоретически 2-е поколение во всех
об работках появляется в тот же день, но за счет воздействия испытуемого вещества на развитие
личинок это не всегда так. В таком случае при более высоких концентрациях 2-е поколение может
появиться позднее по сравнению с более низкими концентрациями и контролем (на растворитель).
9.1.5.3 В дизайне с обогащенной водой систему осадок-вода для 2-го поколения готовят внесе
нием испытуемого вещества в надосадочную водную колонку примерно за 1 ч до добавления личинок
первой стадии развития в испытуемые сосуды. Небольшие объемы растворов испытуемого вещества
вносят пипеткой ниже поверхности воды. Затем надосадочную воду осторожно перемешивают, не на
рушая осадок. После обогащения проводят легкую аэрацию.
9.1.5.4 Вдизайне с обогащенным осадком обработанные сосуды, содержащие систему осадок-во
да для 2-го поколения, готовят аналогичным образом как для 1-го поколения.
9.1.5.5 В каждый испытуемый сосуд, содержащий систему обогащенный осадок-вода, произволь
но вносят 20 личинок первой стадии развития 2-го поколения (максимум в течение 48 ч после вылупле-
ния). используя пипетку с тупым кончиком. Аэрацию воды останавливают во время внесения личинок
в испытуемые сосуды и еще на 24 ч после этого. Согласно выбранному дизайну испытания (см. 8.1.2 и
8.2.1) число используемых личинок на каждую концентрацию составляет не менее 120 (6 повторностей
на каждую концентрацию) при установлении ЕСХи 160 при установлении NOEC (8 повторностей на
каждую концентрацию).
9.1.6 Корм
Л
ичинок кормят предпочтительно каждый день или не менее трех раз в неделю. Корм для рыб
(суспензия в воде или мелко измельченный корм, например. Tetra-Min или Tetra-Phyll: подробное опи
сание см. в приложении А) в количестве 0.25-0.5 мг (0,35-0.5 мгдля С. yoshimatui) на личинку в сутки
является достаточным для личинок раннего возраста в течение первых 10 сут. Немного больше корма
требуется для личинок более старшего возраста: 0,5-1 мг на личинку в сутки является достаточным
для остального периода испытания. Количество корма снижают во всех обработках и контроле, если
отмечен рост грибов, или в контроле наблюдается гибель личинок. Если невозможно остановить рост
грибов, то испытание повторяют заново.
В общем, токсикологическое значение воздействия через потребление внутрь является выше для
веществ с высоким сродством к органическому углероду или веществ, ковалентно связывающихся с
осадком. Следовательно, при испытании веществ с такими свойствами корм, необходимый для обе
спечения выживаемости и естественного роста личинок, добавляют к искусственному осадку до ста
билизации в зависимости от нормативных требований. Для предупреждения ухудшения качества воды
используют растительный материал вместо корма для рыб. например, добавляют 0,5 % (сухая масса)
мелко измельченных листьевжгучей крапивы (Urticadioeca), шелковицы (Mornsalba), клевера ползучего или
7