ГОСТ 33528—2015
воды. Содержимое колбы тщательно перемешивают. После полного растворения красителя раствор
фильтруют через складчатый бумажный фильтр.
Срок хранения раствора для фиксации и окраски геля в стеклянной емкости с плотно завинчива
ющейся крышкой при температуре (4 ± 2) °С — не более 1 мес.
8.1.9 Раствор для отмывки геля
В коническую колбу на 1000 см3вносят 670 см3дистиллированной воды. 90 см3 ледяной уксусной
кислоты и 240 см3этилового спирта. Перемешивают до полного растворения.
Срок хранения раствора для отмывки геля в емкости из полиэтилена с плотно завинчивающейся
крышкой при комнатной температуре — не более 6 мес.
8.2 Подготовка контрольной пробы
Для приготовления контрольных проб белка применяют исключительно сырое коровье молоко по
ГОСТ 31449 с кислотностью 16.0—20.0 °Т. выдерживающее испытание на термоустойчивость согласно
ГОСТ 25228 по алкогольной пробе на группу I или !!.
П р и м е ч а н и е — Не допускается получение контрольных белков из молока с низкой термоустойчивостью
или с примесью молока других биологических видов животных.
8.2.1 Предварительное обезжиривание
8.2.1.1 Метод сепарирования
Сырое коровье молоко перед сепарированием подогревают на водяной бане до температуры
40 °С — 45 вС.
Сепарирование молока осуществляют в соответствии с инструкцией по эксплуатации для выбран
ной модели сепаратора до получения обезжиренного молока массовой долей жира не более 0,05 %.
После сепарирования обезжиренное сырое коровье молоко используют для дальнейшего анали
за.
8.2.1.2 Метод центрифугирования
0.4—0.5 дм3 сырого коровьего молока помещают в центрифужные пробирки и центрифугируют
при 5000 об/мин в течение 20—30 мин. После центрифугирования центрифужные пробирки помещают
в холодильник и охлаждают при температуре (4 ± 2) °С. После полного охлаждения застывший верхний
жировой слой удаляют, а оставшееся обезжиренное молоко применяют для дальнейшего анализа.
8.2.2 Выделение белков
8.2.2.1 Выделение казеина
В химический стакан вместимостью 250 см3 вносят 50 см3 предварительно обезжиренного моло
ка массовой долей жира не более 0.05 % по ГОСТ 5867, нагревают на водяной бане до температуры
35 °С — 40 ’С и осаждают казеин, прибавляя по каплям раствор соляной кислоты, приготовленный по
8.1.1 до 4.5—4.6 ед. pH. Осадку дают отстояться, сыворотку осторожно сливают. Осадок промывают,
добавляя 50 см3дистиллированной воды, перемешивают, дают отстояться и сливают воду.
Промывают осадок не менее пяти раз.
Затем к промытому осадку добавляют 30 см3ацетона и оставляют на 30 мин. затем ацетон осто
рожно сливают. Действие повторяют до полного удаления жира, но не менее пяти раз. Осадок фильтру ют
через сухой складчатый фильтр и переносят в коническую колбу вместимостью 250 см3, заливают 120
см3 диэтилового эфира и закрывают притертой пробкой. Перемешивают не менее 5 мин и оставля ют на 12
ч в холодильнике. Через 12 ч осадок фильтруют через сухой складчатый фильтр и подсушива ют на
воздухе в вытяжном шкафу не менее 1ч.
(10,0 ± 0.1) г подсушенного осадка переносят в коническую колбу вместимостью 100 см3, до
бавляют 60 см3 раствора мочевины, приготовленного по 8.1.2. перемешивают на магнитной мешалке
при температуре (50 ± 5) °С до полного растворения. Получившийся раствор переносят в мешочек для
диализа, изготовленный из целлофановой пленки, который погружают в дистиллированную воду и по
мещают в холодильник. Диализ (освобождение раствора от низкомолекулярных соединений) проводят
не менее 24 ч при периодической смене дистиллированной воды. После чего образовавшийся оса док
фильтруют через сухой складчатый фильтр и высушивают в эксикаторе над безводным хлористым
кальцием не менее 4 ч.
Срок хранения выделенного казеина в емкости из темного стекла с плотно завинчивающейся
крышкой при температуре (4 ± 2) °С — не более 6 мес.
6