ГОСТ 33528—2015
8.2.2 2
Выделение сывороточных белков
Сыворотку, оставшуюся после выделения казеина по 8.2.2.1, сливают в коническую колбу вмести
мостью 250 см3и добавляют аммоний сернокислый [на 25 см3сыворотки (17,5 ± 0.1) г аммония серно
кислого]. и тщательно перемешивают до полного растворения. Помещают в холодильник при темпера
туре (4 ± 2) еС на 12 ч. Отделившийся белок фильтруют через сухой складчатый фильтр и переносят в
мешочек для диализа, изготовленный из целлофановой пленки, который погружают в дистиллирован
ную воду и помещают в холодильник. Диализ проводят не менее 24 ч при периодической смене дис
тиллированной воды. Через 24 ч образовавшийся осадок фильтруют через сухой складчатый фильтр и
высушивают в эксикаторе над безводным хлористым кальцием не менее 4 ч.
Срок хранения выделенных сывороточных белков в емкости из темного стекла с плотно завинчи
вающейся крышкой при температуре (4 ± 2) °С — не более б мес.
8.3 Подготовка проб
8.3.1 Молоко
Предварительное обезжиривание и выделение белков из проб молока осуществляется по 8.2.1 и
8
.
2
.
2
.
8.3.2 Молочныо продукты
10—15 г сметаны или творога смешивают с 50 см3этилового спирта объемной долей не менее
95.0 итщательно перемешивают в колбе или растирают в фарфоровой ступкедо образования мелкоди
сперсной взвеси и оставляют на 15 мин. Затем осадок отделяют центрифугированием при 3000 об/мин
в течение 3 мин или фильтруют через бумажный складчатый фильтр. Осадок тщательно перемешивают с
50 см3 ацетона в химическом стакане или колбе с притертой пробкой и оставляют на 20 мин. затем
ацетон осторожно сливают или отделяют центрифугированием при 3000 об/мин в течение 3 мин. Дей
ствие повторяют до полного удаления жира, но не менее пяти раз. Отмытый ацетоном осадок помеща
ют в колбу вместимостью 100 см3с притертой пробкой, заливают 60 см3диэтилового эфира, закрывают
пробкой и выдерживают в холодильнике при температуре (4 ± 2) °С в течение 12 ч. периодически по
мешивая. Через 12 ч осадок фильтруют через сухой складчатый фильтр и подсушивают на воздухе в
вытяжном шкафу не менее 1 ч.
Высушенную пробу обезжиренных белков молочного продукта готовят к анализу по 8.4.1.
8.4 Приготовление растворов белков для анализа
8.4.1 Контрольная проба
В микроцентрифужную пробирку типа «Эппендорф» вместимостью 1.5 см3 помещают (0.0040 ±
0.0005) г белка, выделенного по 8.2, добавляют 0.5 см3раствора мочевины, приготовленного по 8.1.2.
вносят 0.05 см3раствора натрия додецилсульфата, приготовленного по 8.1.5, и выдерживают в термо
стате при температуре 95 °С в течение 5 мин. тщательно перемешивают на аппарате для встряхивания
«Вортекс» до полного растворения белков. К полученному раствору добавляют 0.2 см3 глицерина и
0.025 см3 лидирующего красителя, приготовленного по 8.1.3, тщательно перемошивают на аппарате
для встряхивания «Вортекс». центрифугируют при частоте 3000 об/мин в течение 5 мин. образовавший ся
осадок отбрасывают, а надосадочную жидкость используют для анализа.
Срок хранения контрольных растворов белков в емкости из темного стекла с плотно завинчиваю
щейся крышкой при температуре (4 ± 2) °С — не более 7 сут.
8.4.2 Анализируемая проба
В микроцентрифужную пробирку типа «Эппендорф» вместимостью 1.5 см3 помещают (0.0040 ±
0,0005) г белка, выделенного по 8.3, добавляют 0.5 см3 раствора мочевины, приготовленного по 8.1.2,
вносят 0.05 см3раствора натрия додецилсульфата, приготовленного по 8.1.5, и выдерживают в термо
стате при температуре 95 °С в течение 5 мин. тщательно перемешивают на аппарате для встряхивания
«Вортекс» до полного растворения белков. К полученному раствору добавляют 0,2 см3 глицерина и
0.025 см3 лидирующего красителя, приготовленного по 8.1.3, тщательно перемешивают на аппарате
для встряхивания «Вортекс». центрифугируют при частоте 3000 об/мин в течение 5 мин. образовавший ся
осадок отбрасывают, а надосадочную жидкость используютдля анализа.
Срок хранения растворов белков анализируемых проб в емкости из темного стекла с плотно за
винчивающейся крышкой при температуре (4 ± 2) °С — не более 7 сут.
7