ГОСТ 33528—2015
Приложение Б
(справочное)
Причины отклонений от стандартного хода анализа и способы их устранения
Б.1 Причины отклонений от стандартного хода анализа и способы их устранения приведены в таблице Б.1.
Т аб лиц а Б.1 — Причины отклонений от стандартного хода анализа и способы их устранения
Отклонение
Возможные причины
Способы устранения
Полосы по краям геля расположе
ны выше, чем в центре
Центральная часть геля нагревает
ся сильнее краев.
Избыточное напряжение
Центральный резервуар заполнить
охлаждающим раствором.
Охлаждающий раствор прокачи
вать при температуре 10 “С —
15 *С. Уменьшить напряжение
Диффузия лидирующего
красителя
Распад раствора белков пробы
и/или растворов буферов.
Диффузия
Приготовить растворы из свежих
реактивов.
Если полосы белка имеют такой же
диффузный характер, как и полоса
лидирующего красителя, увеличить
силу тока на 25 % — 50 %
Вертикальная исчерпанность
трека
Избыточная концентрация белков
в пробе
Уменьшить концентрацию белков
в пробе.
Уменьшить напряженке на 25 %
Горизонтальная исчерчвнносгь
трека
Неполное растворение белков
Полностью растворить пробу.
Центрифугировать
Широкие или размытые полосы
или пятна белков
Диффузия в связи с медленной
миграцией.
Химические модификации ионны
ми загрязнениями.
Неполное обезжиривание пробы
Увеличить силу тока на 20 %.
Деионизовать раствор мочевины.
Полностью удалить жир
Размывание полос в латеральном
направлении
Диффузия растворов белков за
пределы лунок до включения на
пряжения
Уменьшить время между внесени
ем пробы и подачей напряжения
в электрофоретическую ячейку
Искривление полос
Недостаточная полимеризация
геля вокруг лунок.
Наличие солей в пробе.
Неровная поверхность геля
Дегазировать раствор мономе
ров геля; увеличить молярную
концентрацию аммония над-
сернокислого и N. N. N’, N -
тетраметилэтилендиамина
на 25 %.
Удалить соли диализом.
Проверить стадию взятия проб для
приготовления геля, при необходи
мости заменить реактивы
Лидирующий краситель
опускается до нижнего края геля
слишком медленно
Высокая концентрация электрод
ного буфера.
Низкое напряжение
Проверить стадию приготовления
электродного буфера (при необ
ходимости разбавить буфер), про
верить качество дистиллированной
воды, заменить реактивы.
Увеличить напряжение
на 25 % — 50 % от установленного
12