ГОСТ 33504—2015
Ацетонитрил для ВЭЖХ.
Кислота трифторуксусная с содержанием основного вещества не менее 98,0 %.
Стандартный образец состава дигидрокверцетина - ДГК МСО 1736 или аналогичный МСО с
аттестованным значением СО от 99,95 % до 100%, при Р = 0,95, погрешность аттестованного
значения 0,05.
Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, посуды с
метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками не хуже, а
также реактивов и материалов по качеству не ниже вышеуказанных.
7.4.3 Отбор проб - по 7.1.
7.4.4 Условия проведения анализа
Режим ВЭЖХ анализа - изократический.
Подвижная фаза: ацетонитрил - кислота трифторуксусная 0.03 % (30 : 70) (об./об.).
Скорость потока подвижной фазы - 1 см3/мин.
Длина волны - 290 нм.
Температура колонки - 20 ®С.
Объем вводимой пробы - 0,02 см3.
Время анализа - 20 мин.
7.4.5 Подготовка к анализу
7.4.5.1 Приготовление раствора стандартного образца (СО)
СО дигидрокверцетина массой 20,0 мг, взвешенный с точностью до 0,2 мг. предварительно
высушенный в сушильном шкафу в течение 60 мин при температуре 105°С, помещают в мерную
колбу вместимостью 100 см3. прибавляют 60 см3 подвижной фазы и помещают в ультразвуковую
баню до полного растворения. После охлаждения раствора до температуры 20 °С объем
содержимого колбы доводят до метки подвижной фазой, перемешивают и фильтруют через фильтр с
размером пор 0,45 мкм, отбрасывая первые 5см3фильтрата. Полученный фильтрат является раствором
стандартного образца.
7.4.5.2 Приготовление раствора анализируемой пробы
Анализируемую пробу массой 50,0 мг, взвешенную с точностью до 0,2 мг, предварительно
высушенную в сушильном шкафу в течение 60 мин при температуре 105 °С, помещают в мерную
колбу вместимостью 50 см3, прибавляют 30 см3 подвижной фазы и помещают в ультразвуковую баню до
полного растворения. После охлаждения раствора до температуры 20 °С объем содержимого колбы
доводят до метки подвижной фазой, перемешивают и фильтруют через фильтр с размером пор 0.45
мкм. отбрасывая первые 5 см3 фильтрата. 5 см3полученного фильтрата помещают в мерную колбу
вместимостью 25 см3, доводят объем содержимого колбы до метки подвижной фазой и
перемешивают.
7.4.5.3 Приготовление раствора подвижной фазы
Для приготовления подвижной фазы смешивают 30 объемов ацетонитрила и 70 объемов 0,03%
трифторуксусной кислоты.
Приготовление 0,03 % трифторуксусной кислоты: в мерную колбу вместимостью 1000 см3вносят
500 см3 дистиллированной воды и 0,3 см3 трифторуксусной кислоты, доводят объем колбы
дистиллированной водой до метки и перемешивают.
7.4.6 Проведение анализа
Последовательно вводят в прибор по 0,02 см3 растворов стандартного образца и
анализируемой пробы, дожидаются окончания анализа.
На хроматограмме анализируемого раствора, кроме пика дигидрокверцетина, допускается
присутствие пиков сопутствующих биофлавоноидов: аромадендрина. эриодиктиола, кверцетина,
нарингенина. кемпферола и пиноцембрина, а также пиков неидентифицированных соединений.
7.4.7 Обработка результатов
7.4.7.1 Массовую долю дигидрокверцетина Хдгк. %, вычисляют по формуле
д
S.-m.-P 50-25S .-m .-P-2.5
Х
д
гк*
--------
----------------=—------
-
-----------.(4)
S o-m ,-100-5SQ-mt
гдеSi - площадь пика дигидрокверцетина на хроматограмме раствора анализируемой пробы,
mAU-c;
то - масса стандартного образца (см. 7.4.5.1). мг;
Р - массовая доля дигидрокверцетина в стандартном образце. %;
10