ГОСТ ISO 9167-1—2015
Пипетки с ионообменной смолой промывают 2 см3 имидазола формиата (4.4). затем дважды
порциями воды по 1 см3.
8.4 Очистка и десульфатация
8.4.1 Проводят процедуры, приведенные в 8.4.2—8.4.5 для каждого объединенного экстракта.
8.4.2 1 см3 экстракта (8.2.4) переносят в подготовленную колонку (8.3). не затрагивая поверх
ность смолы, и позволяют жидкости стечь. Вносят две порции по 1 см3раствора ацетата натрия (4.2),
позволяя ему впитаться в объем смолы после каждого добавления.
8.4.3 Вносят в колонку 75 мм3разведенного раствора очищенной сульфатазы (4.8.4). Оставля
ют на ночь при комнатной температуре.
8.4.4 Помещают пробирку (5.6) под колонку для сбора элюата.
Элюируют содержащийся десульфоглюкозинолат двумя порциями воды по 1 см3, позволяют
воде впитаться в объем смолы после каждого добавления.
8.4.5 Элюат тщательно перемешивают. Если элюат не используют незамедлительно для прове
дения хроматографии, его допускается хранить в темноте в морозильной камере при температуре
минус 18‘С в течение одной недели.
8.5 Контрольное испытание
Если требуется (9.3), то проводят контрольное испытание, отбирая анализируемую пробу, ис
пользуя аналогичную процедуру отбора тестовой порции из той же анализируемой пробы, но без ис
пользования раствора внутреннего стандарта синигрина, с целью обнаружения и определения коли
чества синигрина, присутствующего в анализируемой пробе.
8.6 Проведение хроматографического анализа
8.6.1 Настройка оборудования
Хроматограф настраивают таким образом, чтобы были достигнуты следующие параметры:
Расход подвижных фаз (4.6), зависящий от особенностей колонки (8.6.2), как правило, равен
приблизительно 1 см3/мин.
Температура колонки (5.2)— 30 ’С.
Рабочая длина волны 229 нм.
8.6.2 Анализ
Анализ проводят в соответствии с инструкциями к оборудованию, в хроматограф вводят не бо
лее 50 мм3раствора десульфоглюкозинолата. полученного по 8.4.4.
Используют градиентное элюирование, соответствующее используемой колонке.
Примечания
1Следующие градиенты элюирования приведены в качестве примеров.
a) Lichrosorb RP18 колонка. £ 5 мкм (150 мм -4.6 мм):
- в течение 1 мин в колонку подается 100 %-ный элюент А (4.6.1);
- в течение 20 мин линейный градиент элюирования со снижением доли элюента А до 0 % и одновремен
ным ростом доли элюента В (4.6.2) до 100 %;
- затем за 5 мин линейный градиент элюирования с ростом доли элюента А до 100 % и одновременным
снижением доли элюента Вдо 0 %;
- подача в колонку 100 %-ного элюента А (4.6.1) в течение 5 мин до достижения равновесия.
b) Lichrospher RP18 колонка. S5 мкм (125 мм - 4 мм):
- подача в колонку 100% элюента А (4.6.1) в течение 2.5 мин:
- далее за 18 мин линейный градиент элюирования со снижением доли элюента А до 0% и одновремен
ным ростом доли элюента Вдо 100 %;
- подача в колонку 100 %-ного элюента В в течение 5 мин:
- затем за 2 мин линейный градиент элюирования с ростом доли элюента А до 100 % и одновременным
снижением доли элюента В до 0 %;
- подача в колонку 100 %-ного элюента А (4.6.1) в течение 5 мин до достижения равновесия.
2 Профили градиента могут быть изменены для оптимизации эффективности и селективности разделения,
соответствующего используемым колонкам.
8.6.3 Обработка хроматограмм
Принимают во внимание только те хроматографические пики, которые имеют площадь более
чем 1 % от общей суммы площадей пиков.
Порядок элюирования пиков на колонке с сорбентом Ств с применяемым градиентным элюировани
ем (см. примеры, приведенные в 8.6.2), как правило, соответствует представленному на рисунке 1.
6