ГОСТ 33280—2015
Для получения антигенов берут производственные штаммы лептоспир и культивируют в течение
пяти — десятисутокв термостатепри температуре(28,0 ± 0.5)°Силивтермальнойкомнатедо накопле
ния 60—100 подвижных лептоспир в поле зрения микроскопа при просмотре на предметном стекле кап
ли культуры, накрытой покровным стеклом. При просмотре используют окуляры 8’ или
10’, бинокулярнуюнасадку 1.5’ иобъектив40". При этом общее увеличениесоставляет480’ или
600’.Допус кается просматриватькультуры без использования бинокулярной насадки, при этом
увеличениесостав ляет 320 —400’.
7.9.1.2 Получение сыворотки
Антигенную активность вакцин проверяют на пяти кроликах. Из подготовленной по 7 8.2.2 объеди
ненной пробы вакцины однократно вводят в ушную вену кроликов: вакцину противлептоспироза свиней в
объеме 0.60 см3; вакцину против лептоспироза крупного рогатого скота, овец и коз — в объеме
0,75см3.Через25сут послевведениявакциныукроликовизушной вены берут 5,0—8.0см3кровииполу
чаютсыворотку.
7.9.2 Определенно антигенной активности в РМА
Готовят разведения сыворотки, полученной по 7.9.1.2. в пробирках посхеме, приведенной в таб
лице 2.
Т а б л и ц а 2 — Схема разведения сыворотки для РМА
Номер
пробирки
Объем,см3
Разведение сыворотки
0.9 %-ного раствора
натрия хлорида
сыворотки
до смешивания с
антигеном
после смешивания
с антигеном
1
4.8
0.2
1:25
1:50
2
1.0
1,0 из разведения 1:25
1.50
1:100
3
1.0
1.0 из разведения 1:50
1:100
1:200
4
1.0
1.0 из разведения 1:100
1:200
1:400
5
1.0
1.0 из разведения 1:200
1:400
1:800
6
1.0
1.0 из разведения 1:400
1:800
1:1600
7
1.0
1.0 из разведения 1:800
1:1600
1:3200
РМА ставят на пластинах из оргстекла с лунками. 0.1 см3каждого разведения сыворотки вносят в
отдельный ряд лунок, состоящий из трех или четырех лунок (в зависимости от числа антигенов), и сме
шиваютс 0.1 см3антигена, полученного по 7.9.1.1.
Контролем реакциислужатлунки, содержащие смесь 0.1 см3каждогоантигена с0.1 см30.9 %-ного
раствора натрия хлорида изотонического (три или четыре лунки), в которых лептослиры должны оста
ваться подвижными без видимыхизменений морфологии, признаковагглютинации илизиса.
7.9.3 Определение антигенной активности в РМА микрометодом
7.9.3.1 Проведение испытания
РМАмикрометодом ставятв96-луночныхполистироловыхпланшетахсО-образнымдном. Готовят
двукратные разведения сыворотки, полученнойпо 7.9.1.2. начиная с разведения 1 : 25. Для этого в пер
вый рядлунок вносят по 0.096 см3 0.9 %-ного раствора хлорида натрия изотонического и добавляют по
0,004 см3сыворотки. В лунки со второго по седьмой ряд вносят по 0.05 см30.9 %-ного раствора натрия
хлорида изотонического. Из разведениясыворотки 1 : 25 после4— 5 кратного перемешиваниявносятпо
0,05 см3во второй рядлунок. Затем после4—5 кратного перемешивания вносят по0,05 см3 разведения
сывороткиизвторогорядалунокв третийи т.д. Из последнего (седьмого) рядалунокпоследобавления и
перемешиваниясывороткиудаляютО.05см3.Наконечникинапипеткахменяютприпереходеот меньше
го разведения к большему. Все разведения сыворотки вносят в три или четыре лунки в зависимости от
числа антигенов.
После приготовлениядвукратныхразведенийсыворотки вкаждуюлунку вносят по0,05см3антиге
на. входящего всоставвакцины. Разведениясывороткидои послесмешиваниясантигеном представле
ны втаблице 2.
8