ГОСТ РИСО 16256—2015
3 Процедуры испытания
3.1 Общие положения
Испытания выполняютв пластиковыходноразовых планшетахдля микроразведения. Методосно
ван на подготовке рабочего раствора антимикотического препарата двойной концентрации объемом
100 мкл налункус добавлением инокулюма объемом также 100 мкл.
3.2 Питательная среда
3.2.1 Общие положения
Следует использовать бульон RPMI-1640 (см. приложение А для уточнений при приготовлении
двух вариантов глюкозногобульона RPMI-1640)
3.2.2 Путь визуального чтения
Среда RPMI-1640должнасодержать0.2 % глюкозы. Бульон RPMI-1640 готовят и разливают води
нарной концентрации с двойной концентрацией разведения антимикотического препарата и инокулюма в
соответствующих объемах бульона RPMI-1640. содержащего суспензию заданного дрожжевого
инокулюма.
3.2.3 Путь спектрофотометрического чтения
Среда RPMI-1640 должна содержать 2 % глюкозы. Бульон RPMI-1640 и антимикотический препа
рат готовят в двойной концентрации с инокулюмом. добавленным позже в соответствующие объемы
стерильнойдистиллированной воды.
3.3 Антимикотические препараты
3.3.1 Общие положения
Антимикотические препараты должны быть получены непосредственно от изготовителя либо из
надежныхкоммерческихисточников: фармацевтическиепрепараты клинического назначения недопус
тимы. Антимикотические препараты должны быть снабжены номером партии, содержанием действую
щих веществ, сроком годности и подробными рекомендациями по условиям хранения. Вещества
следуетхранитьв плотнозакрытыхконтейнерахвтемноте, при температуреминус20 °С, сосушителем,
если изготовителем не рекомендовано иное. Гигроскопичные препараты должны быть разделены на
аликвоты, каждую из которыхиспользуютдля одного испытания.
Прежде чемоткрыватьконтейнеры, ихоставляют нагреватьсядо комнатнойтемпературы во избе
жание образования конденсата ипотери активности.
3.3.2 Приготовление основных растворов
Для взвешивания антимикотических препаратов требуются калиброванные аналитические весы.
Расчет активности порошка для получения необходимого количества субстанции антимикотического
препарата или количества разбавителя, необходимого для стандартного раствора, проводят по
следующим формулам:
(
1
)
(
2
)
где р — концентрация основного раствора, мг/л;
т — масса антимикотического препарата (порошок), г;
Р — активностьантимикотического препарата (порошок), мг/г;
V— объем разбавителя, л.
Концентрацияосновного растворадолжнабыть 1000мг/лили более, несмотрянато. чтораствори
мость некоторыхпрепаратов является лимитирующим фактором. Фактические концентрацииосновных
растворовзависятотметода приготовлениярабочихрастворов (серийныхразведений). Некоторыепре
параты требуютальтернативных растворителей (см. таблицу 1). Обычно нет необходимости в стерили
зации растворов. Если требуется, стерилизация должна быть выполнена методом мембранной
фильтрации, а образцы до и после стерилизации должны пройти сравнительный анализ для гарантии
того, что не произошла адсорбция.
4