ГОСТ РИСО 16256—2015
3.6 Инокулирование планшетовдля микроразведения
Планшетыдолжны бытьинокулированы втечение30мин стандартизованнойсуспензией инокулю-
ма вцеляхсохраненияконцентрациижизнеспособныхклеток. Вкаждуюлунку, содержащую 100 мкл раз
веденного в бульоне антимикотического препарата (см. 3.5.2 и 3.5.3), добавляютдрожжевую суспензию
объемом 100 мкл.
Для гарантии того, что тестовые лунки содержат соответствующее КОЕ, в лунке позитивного кон
троля в планшетах для микроразведения периодически следует проводить подсчет жизнеспособных
клеток,основанный на методе, используемом для чтения МПК. Дляэтого берут 10мкл излунки контроля
роста непосредственнопосле инокулирования иразводятв 1млбульонаили физиологического раство ра
(для метода визуального чтения), или в 2 мл стерильной дистиллированной воды (для метода спект-
рофотометрического чтения). 100 мкл разведенной суспензии распределяют по поверхности
подходящей агаровой пластины (агаризованной среды), которая затем инкубируется в течение ночи.
Приемлемая тестовая суспензиядаст в результате от 5 до 125 колоний.
3.7 Инкубирование планшетовдля микроразведения
3.7.1 Общие положения
Планшетыдля микроразведения перединкубированиемдолжны бытьзапечатаны в полиэтилено
вые пакеты или зафиксированы плотной крышкой либо любым другим способом для предотвращения
высушивания. В целяхпредотвращения неравномерности нагревания планшеты для микроразведения
неследуетукладывать в стопки болеечем по пять штук.
Планшеты длямикроразведенияинкубируютсяпри температуре(35 ± 2)вСв течение (22
1
2)чдля
большинства антимикотических противодрожжевых соединений. Некоторые изоляты Cryptococcus не
могут расти в достаточной мере, еслитемпература не снижена до 30 °С.
3.7.2 Визуальный путь
Время инкубации будет варьироваться в зависимости от испытуемых видовдрожжей и антимико
тических препаратов. Многие тесты можно прочитать после 24 ч инкубации. Конкретные периоды инку
бации см. в приложении С. Для обновления данной информации — см. текущее издание CLSI
— документ М27 [1].
3.7.3 Спектрофотометрический путь
Определение МПКследуетпроводитьпосле (24 ± 2)ч, если спектральное поглощениелунки пози
тивного контроля ;>0.2. Еслиабсорбцияменее0,2, тесты могутбытьповторноинкубированы на 12—24ч. В
случае отсутствия значения абсорбции 0,2 через48 ч. испытание считается неудавшимся.
3.8 Чтение результатов МПК
3.8.1 Общие положения
Результаты следует читать только в случаедостаточного роста испытуемыхорганизмов (т. е. при
явном пятне или приемлемой мутности/ абсорбции) в положительном контроле роста, при отсутствии
ростав неинокулированном или негативном контроле (при наличии) иприустановленнойчистоте иноку
лята.
3.8.2 Метод визуального чтения
С некоторыми антимикотическими лекарственными препаратами инекоторыми изолятами может
иметьместоследовый рост (частичноеингибирование роста в расширенномдиапазоне антимикотичес
ких концентраций). Предполагается, что это случается с флуконазолом примерно с 5 % изолятов (11).
Данныйследовыйростможетбытьуизолята, которыйпроявляетчувствительностьчерез24ч, становит
ся полностью резистентным, если чтение выполняется через 48 ч. По этой причине предпочтительно
чтение через24 ч.
Для визуальногоопределения МПКлунки планшета исследуют с нижней стороны с помощью зер
кального прибора для чтения. Может оказаться полезным осторожное перемешивание содержимого
планшетов перед чтением конечных точек. Для препаратов флуцитозин, азолов и эхинокандинов сте
пень роста в каждойлунке сравниваютс положительным контролем роста, а значения МПКопределяют
по наименьшей концентрации препарата, который ингибирует рост взначительной степени (по крайней
мере 50 %) по сравнению с контролем.
Для амфотерицина МПК — это концентрация, обеспечивающая полное подавление роста.
3.8.3 Методспектрофотометрического чтения
Для спектрофотометрического определения МПК панели для микроразведения читаются с
помощью микропланшетного ридера при длине волны между 405 и 530 нм. Чтение фоновой лунки кон-
8