ГОСТ ISO 13082—2014
Порошоклипазы часто имеет плохую растворимость, иэто свойство зависит от pH. Высокиезначе
ния pH облегчают растворение. Решающим моментом для хорошей воспроизводимости являются усло
вия. когда при растворении порошка липазы значение pH всегда одинаково.
П р и м е ч а н и е — При необходимости можно использовать мерные колбы различной вместимости.
7.3 Проба сычужной пасты
Для получения однородной консистенции сычужную пасту перемешивают. В 40 см3воды в мешке
Stomacher (5.6) растворяют (15 ± 1) г сычужной пасты. Регулируют pH полученного раствора до значе ния
(8.50 i 0.10) ед. pH раствором NaOH молярной концентрации 0.1 мольУдм3. Используя гомогениза тор
Stomacher (5.6), гомогенизируют раствор при скорости 230 об/мин в течение 60 с. Вновь регулируют pH до
значения 8.5 ед. pH и анализируют полученную пробу сычужной пасты в кратчайшие сроки, но не позднее
чем через 2 ч после приготовления.
Допускается проводитьгомогенизацию раствора сычужной пасты вручную в мешке Stomacher в те
чение 60 с.
Записывают точное количество взятой пробы и суммарное количество разбавленной пробы, в
граммах, с точностью до третьего десятичного знака.
Определяют коэффициент разбавления d (8.1) сычужной пасты: общая масса разбавленной про
бы (в том числе масса пробы сычужной пасты), деленная на массу пасты.
Типичная сычужная паста обладает низкой активностью. Если в анализируемом растворе не дос
тигается требуемая активность (4 ± 1) ILU/см3.раствор сычужной пасты анализируют без дальнейшего
разбавления. В данном случае в протоколе испытаний отмечают, что активность анализируемого рас
твора была ниже значений активности требуемого диапазона.
7.4 Методика анализа
7.4.1 Подготовка оборудования
7.4.1.1 Оборудование для анализа готовят в соответствии с 7.4.1.2—7.4.1.7.
7.4.1.2 Проводят предварительный нагрев водяной бани (5.3) для достижения температуры
42,0 вС внутри реакционного сосуда. При необходимости температуру водяной бани слегка регулируют
для достижения температуры в реакционном сосуде на уровне (42.0 з.0.5) °С.
7.4.1.3 Заполняют бюретку (5.5) раствором гидроксида натрия (4.6).
7.4.1.4 Градуируют рН-электрод.
7.4.1.5 Устанавливают pH титрования на значении 6,20 pH или выбирают установленную пользо
вателем программу титрования липазы.
7.4.1.6 Устанавливают реакционный сосуд на титратор и включают мешалку.
7.4.1.7 Устанавливают готовые для анализа pH-электрод и термометр.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ — Энергичное перемешивание позволяет реакции протекать опти
мальным образом.
7.4.2 Испытание
Испытание проводят следующим образом.
a) При помощи пипетки (5.1) добавляют 10 см3субстрата (7.1) в реакционный сосуд.
b
) При помощи пипетки (5.1) добавляют 1 см3анализируемого раствора липазы (7.2) или сычуж
ной пасты (7.3) к субстрату.
c) Начинают титрование и проводят его в течение 15 мин. Первые пять минут используют длядо
ведения pH до значения 6.20 pH, при этом расход гидроксида натрия в расчетах не учитывают. Стабиль
ное значение pH на уровне 6,20 pH должно быть достигнуто в течение первых 4 мин титрования.
Записывают расход гидроксида натрия в течение последних 10 мин [молярная концентрация с в форму ле
(1)].
Если значение pH не достиглостабильного значения 6,20 pH в течение первыхдвух минуттитрова
ния, то значение pH регулируют путем добавления вручную с помощью пипетки соляной кислоты (HCI)
молярной концентрации 0.1 моль/дм3 или 1 моль/дм3 до получения значения pH в диапазоне
(6.20 ± 0,02) pH после 4 мин титрования. При необходимости испытание повторяют.
Скорость расхода гидроксида натрия должна быть линейной. Если расход нелинейный, это может
быть обусловлено недостаточным перемешиванием. Необходимо обеспечить энергичное перемешива
ние, наблюдая, чтобы на поверхности жидкости в реакционном сосуде происходило перемещение сме
си. Проверяют линейность кривой титрования, например путем записи расхода раствора гидроксида
4