ГОСТ Р 55979—2014
5.4.1 Приготовление основного раствора анализируемой пробы ферментного препарата
В стаканчик для взвешивания шпателем помещают (0.1000 ± 0.0002) г сухого ферментного пре
парата для получения анализируемой пробы или (1,00 ± 0.02) см3
жи
д
кого
ферментного препарата
вносят в другой стаканчик пипеткой. Полученную пробу ферментного препарата суспендируют в стек
лянном бюксе с небольшим количеством дистиллированной воды и количественно переносят в мер
ную колбу вместимостью 100 см3, доводят объем до метки дистиллированной водой при температуре
20 СС и тщательно перемешивают. Приготовленный раствор ферментного препарата является основ
ным раствором анализируемой пробы.
Срок хранения основного раствора ферментного препарата при температуре 20 °С — не более
1 мес.
5.4.2 Приготовление рабочего раствора анализируемой пробы ферментного препарата
Рабочий раствор анализируемого ферментного препарата готовят из основного раствора по
4.4.2 путем дальнейшего разведения его дистиллированной водой в зависимости от предполагаемой
активности таким образом, чтобы при ее определении показания оптической плотности спектрофото
метра были в пределах от 0.100 до 0.350 нм.
С учетом разведения рассчитывают количество препарата, взятого на анализ.
Каждую пробу анализируют два раза в условиях повторяемости в соответствии в требованиями
ГОСТ Р ИСО 5725-2.
Раствор готовят в день определения. Длительность использования рабочего раствора фер
ментного препарата не должна превышать 1 ч с момента приготовления во избежание потерь его
ферментативной активности.
5.5 Проведение определений
Перед началом определения активности готовят реакционную смесь путем смешивания в стро
гой последовательности трех растворов: 0.8 %-ный раствор лектина + раствор трис-НСЬбуфера мо
лярной концентрации 0.2 моль/дм3 + раствор хлористого кальция молярной концентрации 0.01
моль/дм3в соотношении 5:2:1 по объему.
Срок хранения реакционной смеси в закрытой стеклянной посуде при температуре 20 °С — не
более 12 ч.
В опытную пробирку наливают 9 см3 реакционной смеси и прогревают на водяной бане в тече
ние 5 мин при температуре 40 °С. В прогретую реакционную смесь добавляют 1 см3раствора фер
ментного препарата и инкубируют на водяной бане 15 мин строго по секундомеру при температуре 40
°С. Затем отбирают 1 см3смеси и переносят в пробирку, содержащую 9 см3раствора соляной
кисло ты молярной концентрации 0.1 моль/дм3для прекращения реакции.
В контрольную пробирку, содержащую 9 см3раствора соляной кислоты молярной концентрации
0.1 моль/дм". приливают 1 см3 раствора ферментного препарата, содержимое тщательно перемеши
вают и добавляют 9 см3реакционной смеси.
Оптическую плотность анализируемого раствора измеряют против контрольного раствора на
спектрофотометре в термостатируемых кварцевых кюветах с толщиной поглощающего свет слоя 1 см
при длине волны 235 нм.
5.6 Обработка результатов
Пектат-лиазную активность (пектат-лС) в анализируемой пробе ферментного препарата вычис
ляют по формулам:
- для сухого препарата в ед.пектат-лС/г:
Т т
0,
Пектат-лС = °° 10
1
где 0о оптическая плотность анализируемого раствора:
10 — разведение реакционной смеси;
Т — время реакции. 0.25 ч;
m — масса ферментного препарата, взятая на анализ, г;
0,1 — условное увеличение оптической плотности в течение часа;
5