ГОСТ Р 52741—2007
6.2.3.6 Приготовление рабочего контрольного раствора витаминов
В пробиркутипа Эппендорфа помещают20 мм3запасного раствора пиридоксинаи 40 мм3запасно
го раствора рибофлавина, специально приготовленныхдля этой цели по6.2.3.1 и 6.2.3.4 соответствен
но. Добавляют 940 мм3 раствора тетраборнокислого натрия (6.2.1.8) и перемешивают. Массовые
концентрации витаминовв рабочем контрольном растворе вычисляютпоформуле (2). Растворследует
использовать в течение 2 ч с момента приготовления.
Рабочий контрольный раствор витаминов используютдля проверки работоспособности прибора и
для контроля стабильности градуировочнойхарактеристики (6.2.5).
6.2.4 Градуировка системы
6.2.4.1 Градуировка системы методом капиллярного зонногоэлектрофореза
Рекомендуемыепараметры вводаи условияанализапредставлены в таблице 4. Непосредственно
переданализом растворы центрифугируют в течение 5 мин при 5000—6000 об/мин.
Т а б л и ц а 4 — Условия анализа градуировочного раствора методом КЗЭ
Определяемые витамины в порядке выхода
Тиамин (В,), рибофлавин (В2). пиридоксим (В4).
аскорбиновая кислота (С), лантотеноеая кислота <В3).
никотиновая кислота (8^). фолиевая кислота (В£)
Ввод градуировочного раствора (пробы)
30 мбар. 20 с
Условия анализа:
Длина волны, нм
200
Напряжение.кВ
+ 25
Давление, мбар
В начале анализа — 0 мбар. после появления пика пиридо
ксина прикладывают давление 30 мбар до конца анализа
Температура. *С
30
Время, мин
16— 18
Ведущий электролит
№ 1 (6.2.1.9)
При выполнении анализа необходимо изменение условий регистрации электрофореграммы, а
именно приложениядавления после появления лика пиридоксина.
Дляопределениямоментавремени, поистечениикоторогонеобходимоприложитьдавление, гото
вятпробный растворвитаминов всоответствиис6.2.3.5 иснимаютпробнуюэлектрофореграмму. Вэтом
случае после регистрации пиридоксина (3-го компонента анализируемого раствора) в ручном режиме
задаютдавление 30мбариведутанализдо появленияпика последнегокомпонента (фолиевойкислоты)
пробы. Для этогобез остановкианализа необходимонажатьклавишу «5» на клавиатуреприбора ивнес
ти новые условия, перелистывая появляющиеся окна клавишей «ENT». Пробную электрофореграмму
не используют для построения градуировочной зависимости. Операцию нахождения времени включе
ниядавления, описаннуювыше, можно выполнитьодин раз ииспользовать полученный параметрдо тех
пор. пока время выхода пиридоксина будет меньшезадаваемого.
Установленный промежуток времени вносят в программу поэтапного анализа системы капилляр
ного электрофореза «Капель-105» (пример составления программы представлен в приложении А. таб
лица А.2) и используют ее для записи электрофореграммы градуировочного раствора и
анализа растворов, полученных из испытуемых проб.
Дляпроведения градуировкисистемы последовательно, неменеетрехраз. готовяти сразужеана
лизируют градуировочный раствор (6.2.3.5). На полученных электрофорограммах проверяют правиль
ность автоматической разметки пиков, при необходимости, корректируют разметку, удаляют лишние
пики и далее обрабатывают электрофореграммы согласно процедуре градуировки, описанной в руко
водстве пользователя программы «МультиХром». В таблице компонентов должно быть столько строк,
сколько витаминов анализируют. В таблице концентраций создают столько градуировочных уровней,
сколько получено электрофореграмм, при этом концентрации компонентов в каждом уровне будут
одинаковые.
После выполненияпроцедуры градуировки программаавтоматически рассчитываетградуировоч
ный коэффициент исреднеквадратичное отклонение (СКО) имеющейся выборки. Градуировку следует
считатьуспешной, есливеличинаСКОне превышает5 % длятиамина (В,). пиридоксина (В6),пантотено-
8