ГОСТ 25134-2013
Шприцы многократного применения стерилизуют кипячением в дистиллированной воде в те
чение 50 - 60 мин.
7.5.3 Проведение испытания
Металлический колпачок флакона с бруцеллином приоткрывают, резиновую пробку обраба
тывают тампоном, смоченным 70 °-градусным спиртом, и шприцем набирают препарат. Бруцеллин
вводят пяти здоровым белым мышам подкожно в области паха или спины в дозе 0.5 см3.
7.5.4 Обработка результатов
Бруцеллин считают безвредным, если все животные остаются клинически здоровыми в тече
ние 10 сут и в месте инъекции отсутствуют признаки воспаления.
7.6 Определение специфичности
7.6.1 Материалы и реактивы по 6.5.1 со следующим дополнением:
- штатив для пробирок:
- пробирки стеклянные по ГОСТ 25336;
- пипетки мерные стеклянные вместимостью 1, 2 и 5 см3по ГОСТ 29230;
- раствор физиологический. pH (7.0
±
0.2);
- референс-препарат активности бруцеллезных аллергенов;
- морские свинки-альбиносы или с белыми боками массой 350 - 600 г.
7.6.2 Подготовка к испытанию
За сутки до проведения испытания на боковой поверхности туловища морских свинок удаляют
шерсть путем выщипывания. Содержимое ампулы референс-препарата бруцеллезных аллергенов
разводят стерильным физиологическим раствором с таким расчетом, чтобы в 1 см3препарата содер
жалось 2000 ЕА. Раствор препарата готовят в день проведения испытания (хранение раствора
недо пустимо). Шприцы многократного применения готовят по 6.5.2.
7.6.3 Проведение испытания
Пяти здоровым морским свинкам бруцеллин вводят в участок кожи с удаленной шерстью
внутрикожно в объеме 0.1 см3. Одновременно на симметричном участке другой стороны туловища
вводят референс-препарат активности бруцеллезных аллергенов в дозе 200 ЕА в объеме 0,1 см3.
Определение специфичности (наличие или отсутствие аллергической реакции) проводят через 24 ч.
7.7 Определение активности
7.7.1 Материалы и реактивы по 6.5.1 и 6.6.1 со следующим дополнением;
- культура вакцинного штамма Brucella abortus 19;
- оптический стандарт мутности на 10 ME (соответствует 1.7 млрд бруцелл).
7.7.2 Подготовка к испытанию
Подготовка к испытанию - по 7.6.2.
Здоровых морских свинок сенсибилизируют путем подкожного введения взвеси двухсуточной
агаровой культуры вакцинного штамма Brucella abortus 19 в физиологическом растворе в дозе 1 - 2
млрд микробных клеток по оптическому стандарту мутности. Через 28 - 30 сут после иммунизации на
морских свинках проводят определение активности бруцеллина. Животные могут быть использованы не
более 6 мес с интервалом между испытаниями не менее 30 сут. При повторных испытаниях пробы ставят
на участках кожи, не повергавшихся воздействию аллергена в предыдущих опытах.
7.7.3 Проведение испытания
Бруцеллин и референс-препарат активности бруцеллезных аллергенов в дозе 200 ЕА вводят
15 сенсибилизированным и пяти здоровым (контрольные животные) морским свинкам внутрикожно в
участки кожи с удаленной шерстью в объеме 0.1 см3по две - пять инъекций с обеих сторон
туло вища.
Иглу вводят в складку кожи свинки, зажатую между большим и указательным пальцами, па
раллельно поверхности кожи с таким расчетом, чтобы не менее 3 мм иглы было погружено в кожу.
Затем складку отпускают и нажимом на поршень вводят точно 0.1 см3препарата. В месте инъекции
должна образоваться папула величиной с горошину. С целью предупреждения вытекания препарата
иглу после введения задерживают на 2-3 с и затем извлекают.
Группа животных может использоваться для испытания до четырех серий препарата. При
этом точки инъекций каждой серии бруцеллина и референс-препарата последовательно чередуют,
обозначая цифрами.
Пример схемы введения трех серий бруцеллина морским свинкам представлен в приложении А.
7.7.4 Обработка результатов
На месте введения аллергенов у морских свинок появляется воспалительная реакция в виде
различной отечной припухлости и гиперемии кожи. Учет интенсивности реакций проводят через 24 ч
после введения препаратов путем измерения в миллиметрах среднего диаметра отека, образующе
гося в месте введения. Диаметр определяют следующим образом: авторучкой на боках животного
7