ГОСТ 25134-2013
туры 30 °С. После этого в среду добавляют 3,4 дм3дрожжевого аутолизата, профильтрованного че
рез стерилизующие пластины. 1 кг глицерина. 1 кг глюкозы, перемешивают и устанавливают pH 6,8 -
7,1.
Содержание аминного азота в питательной среде должно быть в пределах 145 - 170 мг/%.
Питательную среду стерилизуют методом мембранной фильтрации или через стерилизующие
пластины.
Срок хранения готовой питательной среды при температуре 2 °С - 8 °С - не более одной неде
ли.
7.3.2.2 Приготовление реактива
Один объем концентрированной азотной кислоты смешивают с четырьмя объемами насы
щенного раствора сернокислого магния. Раствор хранят в посуде с притертой пробкой неограничен ное
время.
7.3.2.3 Приготовление основного раствора белка в питательной среде
В 100 см3 питательной среды по 7.3.2.1 растворяют 100 мг кристаллического бычьего альбу
мина. Из исходного раствора готовят разведения по схеме, приведенной в таблице 2.
Т а бл и ца 2
____________________________________________________________________________________
Номер
Объем, см3Концентрация бел-
пробирки
исходного растворадистиллированной воды
ка. мг/дм3
1 0.1 4.9 20
2 0.3 4.7 60
3 0.5 4.5 100
4 0.7 4.3 140
5 0.9 4.1 180
6 1.1 3.9 220
7 1.3 3.7 260
8 1.5 3.5 300
9 3.5 6.5 350
10 1.0 3.0 400
11 4.5 5.5 450
12 3.0 3.0 500
7.3.2.4 Построение градуировочной кривой
Каждое разведение белка по 1 см3 вносят в три пробирки. Затем в пробирки добавляют по 1
см3реактива по 7.3.2.2. Через 15 мин проводят измерение плотности полученных растворов на фото
электроколориметре при длине волны 420 - 450 нм. используя кюветы с толщиной слоя 0.5 см.
Для построения градуировочной кривой на оси абсцисс откладывают средние показания экс-
тинкций. а на оси ординат - концентрацию белка в мгдм’.
7.3.3 Проведение испытания
В пробирку вносят 1 см3исследуемого бруцеллина и 1 см3реактива no 7.3.2.2 и смешивают
путем встряхивания. Через 15 мин помутневшую жидкость колориметрируют на фотоэлектроколори
метре при длине волны 420 - 450 нм. используя кюветы с толщиной слоя 0.5 см. и записывают пока
зания прибора.
7.3.4 Обработка результатов
Из трех параллельных определений находят среднее значение показателя оптической плот
ности и по градуировочной кривой определяют содержание белка в бруцеллине в мг.дм3.
7.4 Определение стерильности
Стерильность бруцеллина проверяют по ГОСТ 28085.
7.5 Определение безвредности
Общие принципы определения безвредности - по ГОСТ 31926.
7.5.1 Материалы и реактивы
Шприц инъекционный вместимостью 5 см3по ГОСТ 22967 илиГОСТ 24861.
Иглы инъекционные по ГОСТ 25046.
Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 18300.
Тампоны ватные стерильные.
Пергаментная бумага по ГОСТ 1341.
Мыши белые клинически здоровые массой 18 - 20 г.
Допускается применение других реактивов и материалов по качеству не ниже вышеуказанных.
7.5.2 Подготовка к испытанию
6