ГОСТ 32277— 2013
- ножницы по ГОСТ 21239:
- стекла предметные 26 * 100 по ГОСТ 9284;
- стекла покровные 20 * 20 по ГОСТ 6672;
- пипетки пастеровские;
- пипетки градуированные вместимостью 5 см32-го класса точности по ГОСТ 29227;
- пробирки вместимостью 2 см3 по ГОСТ 25336;
- пробки резиновые для пробирок;
- салфетки марлевые стерильные;
- натрий лимоннокислый трохзамещенный по ГОСТ 22280. 2.9 %-ный раствор:
- алюминиевый сосуд Дьюара вместимостью 4 -3 5 дм3.
Допускается использованиедругого оборудования с техническими характеристиками, а также ма
териалов. реактивов и посуды по качеству не ниже вышеуказанных.
6.1.3 Подготовка к проведению анализа
6.1.3.1 От каждого свежеполученного эякулята отбирают 0.1 - 0 .5 см3спермы; от каждой партии
замороженной спермы, расфасованной в соломинки, облицованные или необлицованные гранулы, от
бирают из жидкого азота по две дозы и помещают в отдельный сосуд Дьюара.,
6.1.3.2 В чистую стерильную пробирку мерной пипеткой вносят 0,5 см32.9 %-ного раствора лимон
нокислого натрия. Затем пробирки закрывают резиновыми пробками и ставят в термостат при темпера
туре /(37 ± 1) °С на срок не более 30 мин.
6.1.3.3 Соломинки или облицованные гранулы со спермой с помощью охлажденного корнцанга, а
необлицованные гранулы с помощью охлажденного анатомического пинцета, вынимают из сосуда Дью
ара. Соломинки или облицованные гранулы погружают в водяную баню при температуре (37 ± 1) °С на
20 - 30 с. а затем вынимают и протирают насухо стерильной салфеткой. Ножницами отрезают оба кон ца
соломинки или один конец облицованной гранулы. Одну дозу спермы из соломинки, облицованной
гранулы или необлицованной гранулы помещают в пробирку с 2.9 %-ным раствором лимоннокислого
натрия, находящуюся в термостате.
6.1.3.4 Затем объем содержимого пробирок доводят до 1 см32.9 %-ным раствором лимоннокислого
натрия, пробирки закрывают резиновыми пробками и перемешивают. Пробирки помещают в термостат при
температуре (37 ± 1)°С на срок не более 30 мин.
6.1.4 Проведение анализа
На электрообогревательный столик микроскопа помещают предметное стекло и после его нагре
ва до температуры (37 ± 1) “С стерильной пастеровской пипеткой из пробирки, находящейся в термо
боксе. наносят небольшую каплю разбавленной спермы и покрывают стеклом. Устанавливают увели
чение. дающее возможность добиться четкого изображения, и. просматривая весь препарат, выбирают
участок с небольшим движением сперматозоидов. Определяют визуально в трех полях зрения соот
ношение сперматозоидов с прямолинейным поступательным движением (ППД) к общему количеству
сперматозоидов, включая и неподвижных, а также сперматозоидов, имеющих манежное и колебатель
ное движение. В случае оценки свежеполученной спермы допускается проведение анализа в капле не
разбавленной спермы.
6.1.5 Обработка результатов
Результаты анализа представляют в процентах.
6.2 Определенно выживаемости сперматозоидов при температуре (37 ± 1) °С после
оттаивания спермы
6.2.1 Сущность метода
Сущность метода заключается в определении количества сперматозоидов в замороженной спер
ме. сохранивших прямолинейное поступательное движение (ППД) после оттаивания и хранения в те
чение 5 ч в термостате при температуре (37 ± 1) "С.
6.2.2 Оборудование, материалы, посуда и реактивы
Оборудование, материалы, посуда и реактивы - по 6.1.2 и 6.2.2.
6.2.3 Подготовка к проведению анализа
Оттаянную сперму в пробирке № 2 по 6.1.3.3 инкубируют в термостате при температуре (37 ± 1)
°С в течение 5 ч.
6.2.4 Проведение анализа
После 1.2 и 5ч инкубации спермы в термостате определяют подвижность сперматозоидов по 6.1.
6.2.5 Обработка результатов
7