ГОСТ 32277— 2013
натрия в соответствии с таблицей 1 из расчета приготовления разведений с интервалом концентрации
сперматозоидов в растворе от 0.02 до 0.20 млрд/см3.
Т а б л и ц а 1
Номер
пробирки
Объем
спермы.
см3
Объем pactoopa
лимоннокислою
натрия, см3
Концентрация
сперматозоидов
о растаоре.
млрд,’ см3
Номер
пробирки
Объем
спермы.
см3
Объем раствора
лимоннокислого
натрия, см3
Концентрация
сперматозоидов
в растворе.
млрд/см3
1
1.0
5.0
0.20
6
0.5
5.5
0.10
2
0.9
5.1
0,18
7
0.4
5.6
0.08
3
0.8
5.2
0.16
8
0.3
5.7
0.06
4
0.7
5.3
0,14
9
0.2
5.8
0.04
5
0.6
5.4
0,12
10
0.1
5.9
0.02
Концентрацию сперматозоидов в каждом разведении уточняют, подсчитывая их количество в ка
мере Горяева по 5.5.1. Измеряют оптическую плотность приготовленных разведений при (675 ± 25) нм в
кювете с толщиной слоя 10 мм.
Для построения градуировочного графика откладывают по оси абсцисс значения концентрации
сперматозоидов, а по оси ординат - соответствующие им величины оптической плотности. Градуиро
вочный график строят для каждого прибора. Проверку градуировочного графика проводят ежемесячно.
5.5.2.4 Проведение анализа
В чистую пробирку наливают 5см33.5 %-ного раствора лимоннокислого натрия и микропипеткой
вносят точно 0.02 см3 свежеполученной слермы быков; 0,01 см3 свежеполученной спермы баранов и
козлов; 0,2 см3 свежеполученной спермы хряков и жеребцов, не допуская попадания пены или вазе
лина. Перед внесением спермы в раствор лимоннокислого натрия микропипетку вытирают снаружи
чистой марлевой салфеткой для удаления излишка спермы. После внесения спермы микропипетку
промывают в этом же растворе, набирая раствор в пипетку и выдувая его не менее трех раз. Суспен зию
тщательно перемешивают, осторожно переворачивая закрытый флакончик, не допуская при этом
образования пены.-
Измеряют оптическую плотность суспензии, используя в качестве контрольного (фонового) рас
твора 3.5%-ный раствор лимоннокислого натрия.
5.5 2.5 Обработка результатов
Концентрацию сперматозоидов в миллиардах на кубический сантиметр (млрд/см3) спермы опре
деляют при помощи градуировочного графика по соответствующему значению оптической плотности
раствора.
За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое значение результатов
двух измерений, выполненных в условиях повторяемости по ГОСТ ИСО 5725-1. Допускаемые расхожде
ния между результатами параллельных определений не должны превышать 10 %.
6 Методы биологических анализов
6.1 Определение подвижности сперматозоидов
6.1.1 Сущность метода
Сущность метода заключается в визуальном определении с помощью микроскопа в раздавленной
капле спермы количественного соотношения сперматозоидов с прямолинейным поступательным дви
жением (ППД) к их общему числу.
6.1.2 Оборудование, материалы, посуда и реактивы
Для проведения анализа применяют:
- микроскоп биологический увеличением 150 - 200 раз;
- столик электрообогреваемый к микроскопу, обеспечивающий поддержание температуры спермы
в пределах (37 ± 1) вС;
- термобокс водяной или электрический, обеспечивающий поддержание температуры (37 ♦ 1) °С;
- корнцанг;
- пинцет анатомический по ГОСТ 21241:
6