ГОСТ 32277— 2013
8.2.1 Сущность метода
Количество мертвых сперматозоидов определяют дифференцированным окрашиванием. Сущ
ность метода заключается в подсчете под микроскопом окрашенных мертвых клеток.
8.2.2 Оборудование, материалы и реактивы
Для проведения испытания применяют.
- микроскоп биологический различных марок с увеличением 600 - 1350 раз (окуляр 15*. объектив
40х или 90х);
- рН-метр-милливольтметр типа pH-340 с диапазоном измерения от 0 до 14 ед. pH, погрешность
♦ 0.04 ед. pH;
- термостат для микроскопа, обеспечивающий поддержание температуры (37 ± 1) °С;
- весы типа ВЛТ-500 (ВТК-500) с погрешностью не более ± 0,08 г по ГОСТ 24104;
- стекла предметные 26 х 100 по ГОСТ 9284;
- стекла покровные 18 х 18 по ГОСТ 6672;
- стеклянные колбы по ГОСТ 1770 вместимостью 100 см3;
- бумагу фильтровальную по ГОСТ 12026;
- эозин водорастворимый;
- нигрозин водорастворимый по ГОСТ 4014;
- натрий лимоннокислый трехзамещенный по ГОСТ 22280. 3 %-ный раствор;
- эфир петролейный;
- воду дистиллированную по ГОСТ 6709.
Допускается использование другого оборудования с техническими характеристиками, средств из
мерений с метрологическими характеристиками, а также материалов, реактивов и посуды по качеству не
ниже вышеуказанных.
8.2.3 Подготовка к проведению анализа
8.2.3.1Вымытые и высушенные предметные стекла обезжиривают, выдерживают в течение 3 ч в
смеси равных объемов этилового спирта с петролейным эфиром.
8 2.3.2 Приготовление 1 %-ного раствора лимонной кислоты
В колбе вместимостью 100 см3 растворяют 1.0 г лимонной кислоты в дистиллированной воде и
доводят объема раствора до метки.
Срок хранения раствора при комнатной температуре - 10 дней.
8.2.3.3 Приготовление 3 %-ного раствора лимоннокислого натрия
В колбе вместимостью 100 см3растворяют 3.0 г лимоннокислого натрия вдистиллированной воде
и доводят объем раствора до метки.
Срок хранения раствора при комнатной температуре - 10 дней.
8.2.3.4 Для доведения 3 %-ного раствора лимоннокислого натрия раствора до pH = 7.2 ± 0.1 до
бавляют 1 %-ный раствор лимонной кислоты no 8.2.3.2. Полученный раствор используют свежеприго
товленным.
8.2.3.5 Приготовление красок
1.5г эозина и 10 г нигрозина растворяют в мерной колбе вместимостью 100 см3в 3 %-ном раство
ре лимоннокислого натрия с pH 7,2 ± 0,1 до метки.
Допускается применять растворы без фоновых красок (нигрозина). При этом готовят только 1% -
5 %-ный раствор эозина на 3 %-ном растворе лимоннокислого натрия с pH 7.2 ± 0.1.
8.2.3.6 Подготовка пробы
В сперме определяют концентрацию сперматозоидов по 5.5. Сперму с высокой концентрацией
сперматозоидов разбавляют до концентрации 0,2 - 0.4 млрд/ см33 %-ным раствором лимоннокислого
натрия.
8.2.4 Проведение анализа
На чистое, обезжиренное, подогретое до температуры (37 ± 1) °С предметное стекло наносят
небольшую каплю неразбавленной или предварительно разбавленной 3 %-ным раствором лимонно
кислого натрия спермы идобавляют две - три капли раствора краски, подогретой до температуры 30 °С.
Сперму и краску смешивают в течение 2 - 4 с и делают тонкие мазки на трех обезжиренных стеклах.
Мазки подсушивают фильтровальной бумагой, высушивают на воздухе и микросколируют с им
мерсионной системой микроскопа при увеличении 600 -1350 раз при голубом или зеленом светофиль
тре.
11