ГОСТ 32277— 2013
8.3.3.4 В сперме определяют концентрацию сперматозоидов по 5.5. Сперму, имеющую высокую
концентрацию, разбавляют до концентрации 0.2 - 0.4 млрд/см3 3 %-ным раствором лимоннокислого
натрия.
8.3.4 Проведение анализа
На обезжиренное предметное стекло наносят каплю спермы, добавляют к ней одну - две капли
раствора краски, смешивают и делают один - два мазка. Мазки сушат на воздухе в течение 5 -1 0 мин
и микроскопируют.
Для измерения используют тубус длиной 152 мм. Окуляр-микрометр вкладывают в окуляр и вин
товой окуляр-микрометр вставляют в тубус микроскопа. Измеряют сперматозоиды при увеличении 300 -
600х.
При измерении линейку окуляр-микрометра накладывают на сперматозоиды и подсчитывают ко
личество делений, приходящихся на длину или ширину сперматозоида.
Длину (ширину) измеряют не менее чем у 20 сперматозоидов.
8.3.5 Обработка результатов
Длину /с или ширину Ьсодного сперматозоида, мкм. вычисляют по формуле
U Фс) - N ■п.(8)
где N - значение одного деления шкалы микрометра окулярного винтового, мкм.
п - число делений шкалы микрометра окулярного винтового, приходящееся на длину или ширину
сперматозоида.
Результат округляют до третьего десятичного знака.
8.4 Определение целостности акросомы
8.4.1 Сущность метода
Сущность метода заключается в определении под микроскопом числа сперматозоидов с интакт
ной или повременной акросомой. Целостность акросомы определяют с помощью дифференцирован
ного окрашивания.
8.4.2 Оборудование, материалы и реактивы
Для проведения анализа применяют:
- микроскоп биологический типа МБИ или МБР с окуляром 15* и объективом 40*;
- весы типа ВЛТ-500 (ВТК-500) с погрешностью не более ± 0,08 г по ГОСТ 24104;
- термометр медицинский максимальный типа ТБ-1 Б по ГОСТ 302 с диапазоном измерения тем
ператур от 32 X до 42 X с пределом допускаемой погрешности ± 0.1 X ;
- стекла предметные 26 * 100 по ГОСТ 9284:
- стекла покровные 18 * 18 по ГОСТ 6672:
- стеклянные колбы по ГОСТ 1770 вместимостью 100 см3;
- эозин водорастворимый:
- нигрозин водорастворимый по ГОСТ 4014;
- натрий лимоннокислый трехзамещенный по ГОСТ 22280. 3 %-ный раствор;
- воду дистиллированную по ГОСТ 6709.
Допускается использование другого оборудования с техническими характеристиками, средств из
мерений с метрологическими характеристиками, а также материалов, реактивов и посуды по качеству не
ниже вышеуказанных.
8.4.3 Подготовка к проведению анализа
8.4.3.1 Вымытые и высушенные предметные стекла обезжиривают, выдерживая в течение 3 ч в
смеси равных объемов этилового спирта с петролейным эфиром.
8.4.3.2 Приготовление красок
В мерной колбе вместимостью 100 см3растворяют в 100 см3дистиллированной воды. 0.67 г эо
зина и 5 г нигрозина.
8.4.3.3 Подготовка пробы
Сперму, имеющую высокую концентрацию, разбавляют до концентрации 0.2 - 0.4 млрд/ см3
3 %-ным раствором лимоннокислого натрия.
8.4.4 Проведение анализа
В пробирке проводят разбавление спермы приготовленным раствором краски в соотношении
1 ; 8 при температуре раствора 37 X . Раствор спермы инкубируют в течение 10 - 15 с. После чего на
13