ГОСТ 32198—2013
ный рост с образованием осадка на дне (скудным или обильным, крошковидным или хлопьевидным),
образование пигмента, наличие на поверхности бульона пленки или пристеночного кольца.
При изучении ферментативных свойств микроорганизмов определяют наличие ферментов про
теолитических, сахаролитических и других специфических свойств для данной группы бактерий. Для
этого исследуемую культуру микроорганизмов высевают на специальные дифференциально-
диагности-ческие среды.
8.9 Определение патогенности выделенных микроорганизмов
Патогенность выделенных микроорганизмов определяют по гемолитическим, плазмокоагулиру
ющим свойствам и биопробе.
8.9.1 Определение патогенности выделенных микроорганизмов по гемолитическим
свойствам
Гемолитические свойства определяют на чашках Петри с кровяным агаром. Для этого изолиро
ванную культуру микроорганизма высевают на поверхность МПА. содержащего 5 % крови. Посевы
инкубируют при температуре (37,5
±
0.5) СС в течение 48 ч. При наличии вокруг выросших колоний зон
гемолиза а или ft — реакцию считают положительной.
8.9.2Определениепатогенностивыделенныхмикроорганизмовпо
плазмокоагулирующим свойствам
Реакцию плазмокоагуляции проводят с использованием свежеполученной или сухой стандарт
ной плазмы кролика.
В пробирку вносят 2 см3 5%-ного раствора лимоннокислого натрия и 8 см3свежеполученной кро
ви кролика. Цитратную кровь оставляют на 18 — 20 ч в холодильнике при температуре 4 °С — 6 °С,
затем подвергают центрифугированию при 3000 об/мин в течение 15 мин. Сыворотку крови над осад
ком эритроцитов отбирают стерильной пипеткой, разбавляют физиологическим раствором в соотно
шении 1:4 и используют для исследования или лиофилизируют для в дальнейшей работе.
Для постановки реакции берут 0.5 см3плазмы, разведенной в соотношении 1:5. которую пере
носят в стерильную пробирку и добавляют 18-20- часовую культуру изолята (культуру берут бакте
риологической петлей). Пробирки помещают в термостат при температуре (37.5
±
0.5) °С и проверяют
наличие свертывания плазмы через 1.2, 5.18 и 24 ч.
Патогенные микроорганизмы продуцируют фермент плазмокоагулазу, который свертывает
плазму. Реакция считается положительной независимо от времени коагуляции плазмы и вязкости
сгустка.
8.9.3 Определение патогенности выделенных микроорганизмов по биопробе
Патогенность выделенных из спермы микроорганизмов определяют на лабораторных животных
(кролики, морские свинки, хомяки, белые крысы и белые мыши), чаще всего на белых мышах. Для
этого используют свежевыделенные 18 — 24-часовые культуры бактерий. Выращенную на соответ
ствующих средах культуру разводят физиологическим раствором в соотношении 1 : 10. 1 : 100, 1
: 1000 и т. д. и вводят животным внутрибрюшинно в количестве 0.5 или 1.0 см3. Для каждого разведе ния
берут не менее четырех животных. Наблюдение за животными проводят в течение 7-10 дней.
При отсутствии гибели животных в опытных группах, выделенные культуры микроорганизмов
считают иепатогенными. В случае гибели хотя бы одного животного в группе исследование проводят на
удвоенном количестве животных. Если и при повторном исследовании происходит гибель живот ных, то
выделенные из спермы микроорганизмы считают патогенными.
13