ГОСТ 32198—2013
8.3 Исследование спермы на наличие синегнойной палочки
Для выделения синегнойной палочки сперму высевают на МПБ с добавлением 1-2 г глюкозы
или лактозы на 100 г МПБ. Инкубируют посевы в течение шести — семи суток в термостате при тем
пературе (37.5
±
0.5) °С. проверяя рост каждые один — два дня. При росте бактерии продуцируют во
дорастворимый пигмент пиоцианин, который постепенно окрашивает бульон в зеленовато-голубой
цвет. На МПА он дает круглые голубовато-серые колонии. При микроскопии — грамотрицательная
палочка.
Основной признак культуры синегнойной палочки — положительная хлороформная проба: к 18-
и часовой культуре добавляют 1,0 см3 хлороформа. Культуру, давшую положительную реакцию
(окраска хлороформа в синий цвет), относят к синегнойной палочке.
8.4 Исследование спермы на наличие анаэробной микрофлоры
Для исследования на наличие анаэробной микрофлоры одну — две капли спермы засевают в
две пробирки со средой Китт Тароцци по 7.2.5. Одну из пробирок после посева материала подогре
вают на водяной бане при температуре 80 *0 в течение 20 мин для уничтожения сопутствующей ве
гетативной микрофлоры. Затем засеянные пробирки помещают в термостат при температуре 37 °С
на 10 сут. Учитывают интенсивность роста, характер осадка, а также наличие и степень газообразо
вания. Дальнейшую идентификацию проводят по ГОСТ 28085.
8.5 Исследование спермы на наличие грибов
Для исследования на наличие грибов чашки с высевами спермы на МПА после подсчета коли
чества микроорганизмов по 8.1 оставляют при комнатной температуре на 8-10 сут в месте, удален ном
от прямых солнечных лучей. По истечении этого срока чашки с посевами проверяют на наличие в них
роста грибов. Идентификацию выросших грибов проводят по |1].
8.6 Исследование спермы на наличие золотистого стафилококка (Staphylococcus aurous)
1
cmj
каждого разведения спермы (от 1 :10 до 1 : 100) переносят в пробирку с питательной сре
дой для выращивания St. aureus по 7.2.6.
Среду для выращивания St. aurous с посевным материалом инкубируют при температуре от 30
°С до 35 °С в течение 24-48 ч. При наличии роста делают пересев петлей на среду для идентифика
ции St. aureus.
Посевы инкубируют при температуре от 30 °С до 35 °С в течение 24-48 ч. Наличие на среде зо
лотисто-желтых колоний грамположительных кокков, окруженных желтыми зонами, свидетельствует о
ферментации маннита. Чистую культуру стафилококка исследуют на наличие фермента плазмокоа-
гулазы. Если обнаружены грамположительные кокки, которые ферментируют маннит и дают положи
тельную реакцию плазмокоагуляции. сперма контаминирована St. aureus.
8.7 Идентификация выделенных микроорганизмов
8.7.1 Чашки с первичными посевами после учета числа выросших в них микроорганизмов ис
пользуют для выделения чистых культур (изолятов) с последующей их идентификацией.
8.7.2 Изучают визуально морфологию колоний микроорганизмов, выросших на чашках с пита
тельными средами: размер, форму, внешний вид. поверхности колоний, цвет.
8.7.3 Из колоний, выросших на питательной среде, готовят мазки, окрашивают их по Граму. мик-
роскопируют и дифференцируют микроорганизмы в зависимости от окраски на грамположительные и
грамотрицательные.
8.8 Изучение морфологических и культуральных свойств микроорганизмов
Для изучения культуральных и ферментативных свойств, по совокупности которых определяют
видовую принадлежность исследуемого микроорганизма, проводят выделение чистой культуры.
Для выделения чистой культуры изолированную колонию одного вида или ее часть стерильной
бактериологической петлей над пламенем горелки переносят в пробирки с МПБ и на поверхность
скошенного МПА штрихом. Посевы инкубируют при температуре (37.5
±
0,5) °С в течение 24 — 48 ч.
В посевах на МПА отмечают наличие пигмента и другие морфологические особенности микро
организмов. В посевах на МПБ отмечают рост бактерий с равномерным помутнением среды, прцдон-
12