ГОСТ 32198—2013
7.1.5 Перед стерилизацией лабораторную посуду (чашки, пипетки, пробирки и т. п.) завертывают
в бумагу или укладывают в металлические пеналы. В верхний конец пипетки вкладывают кусочек ва
ты.
7.1.6 Вымытую лабораторную посуду после высушивания стерилизуют в автоклаве при давле
нии 0.1 МПа в течение 20 мин или в сушильном шкафу при температуре 160 вС — 180 °С в течение
двух часов.
7.2 Приготовление сред и реактивов
Питательные среды приготавливают и стерилизуют в соответствии с требованиями ГОСТ ISO
11133-1 и ГОСТ ISO 11133-2.
7.2.1 Приготовление мясо-пептонного бульона (МПБ)
Парное говяжье (или конское) мясо, освобожденное от жира и сухожилий, пропускают через мя
сорубку. взвешивают и заливают двойным количеством водопроводной воды, отмечают первона
чальный объем смеси и оставляют при температуре 4 ®С— 6 °С на 12-24 ч или выдерживают в тер
мостате при температуре 50 °С в течение одного часа. Затем кипятят в течение 30 — 60 мин. Мясную воду
охлаждают (жир застывает и легко удаляется), фильтруют через ватно-марлевый или двойной
бумажный фильтр до полной прозрачности и доводят до первоначального объема дистиллированной
водой.
К одному литру мясной воды добавляют 10 г сухого пептона и 0.5 г хлористого натрия. Устанав
ливают pH 7.2-7.4, добавляя насыщенный раствор двууглекислой соды или 10 %-ный раствор едкого
натра. Раствор кипятят в течение 30 мин. доливают дистиллированной водой до первоначального
объема, фильтруют через двойной бумажный фильтр и окончательно устанавливают pH 7,2-7,4. За
тем разливают в пробирки или флаконы и стерилизуют в автоклаве в течение 20 мин при температу ре
120 °С и давлении 1.0 — 1.5 атм. Если после стерилизации в МПБ выпадает осадок, то его филь труют
вторично и снова стерилизуют.
Срок хранения МПБ во флаконах или пробирках с соблюдением правил асептики в темном ме
сте при температуре 20 СС — 25 ’С — не более 14 дней.
7.2.2 Приготовление мясо-пептонного агара (МПА)
К одному литру мясо-пептонного бульона по 7.2.1 добавляют 20 г предварительно измельченно
го. замоченного и хорошо промытого дистиллированной водой агара и кипятят на слабом огне при
постоянном помешивании до полного его растворения. При помутнении среды ее просветляют. МПА
в горячем состоянии фильтруют через вату, разливают во флаконы или колбы и стерилизуют в авто
клаве при температуре 120 5С и давлении 0,7-1.0 атм в течение 10-20 мин. К расплавленному МПА
добавляют стерильный концентрированный (40 %-ный и более) раствор глюкозы до конечной концен
трации в среде 1 % и дополнительно стерилизуют текучим паром в течение 30 мин при температуре
105 вС-110 еС идавлении 0.7 — 1.0 атм. Полученную среду проверяют на стерильность.
Допускается применение готового сухого питательного агара, из которого готовят МПА в соот
ветствии с указаниями, прилагаемыми к препарату, добавляя 1 %-ный раствор глюкозы. Каждую но
вую серию сухого питательного агара проверяют на качество (ростовые свойства) путем посева раз
ных бактериальных культур. Их рост контролируют, высевая те же культуры на МПА. который приго
тавливают в лабораторных условиях. Если рост на среде из сухого питательного агара неудовлетво
рительный (колоний в посеве вырастает менее на 15 % и более по сравнению с контролем), то к та кой
среде добавляют в количестве 1/4 — 1/3 части от первоначально взятого объема МПБ по 7.2.1 и снова
контролируют качество среды.
Срок хранения МПА во флаконах или пробирках с соблюдением правил асептики в темном ме
сте при температуре 20 °С — 25 °С — не более 14 дней.
7.2.3 Приготовление среды Эндо
К 100 см32 %-ного МПА по 7.2.2 с pH 7.4-7,6. расплавленного и охлажденного до температуры
70 СС. добавляют 1 г глюкозы, растворенной в 5 см3стерильной дистиллированной воды, прогретой в
водяной бане при температуре 90 вС в течение 5 мин.
В отдельных пробирках готовят 10 %-ный спиртовой раствор основного фуксина и 10 %-ный
водный раствор сернистокислого натрия.
К 0.5 см3отфильтрованного спиртового раствора основного фуксина добавляют 10 %-ный вод
ный раствор сернистокислого натрия до получения бледно-розового окрашивания. Приготовленную
смесь приливают к 100 см3расплавленного МПА с глюкозой, хорошо перемешивают и разливают
по чашкам.
7