ГОСТ 32198—2013
При положительной реакции на бродильный титр проводят исследование на идентификацию
кишечной палочки. Для этого из пробирок с измененным цветом среды и газообразованием произво дят
посев на среду Эндо с таким расчетом, чтобы получить отдельные колонии.
Перед посевом дно чашки со средой Эндо делят на четыре сектора. Из каждой пробирки петлей
высевают минимальное количество материала на отдельный сектор. Чашки с посевами крышками
вниз помещают в термостат при температуре (37.5
±
0.5) °С на 18-24 ч.
При отсутствии роста на среде Эндо колоний, типичных для бактерий группы кишечной палочки,
сперму считают не загрязненной микроорганизмами этого вида.
При появлении на среде Эндо колоний, типичных для бактерий группы кишечной палочки (крас
ных. нередко с металлическим блеском, розовых, бледно-розовых), а также бесцветных колоний про
водят их идентификацию по 8.2.4.
8.2.4 Окраска препаратов
Из изолированных колоний, характерных для бактерий группы кишечной палочки, приготавли
вают препараты, которые окрашивают или по методу Грама. или по методу Грама в модификации
Калины и микроскопируют.
8.2.4.1 Окраска по методу Грама
Мазок культуры, помещенный на предметное стекло, фиксируют над пламенем горелки и накла
дывают кусочек фильтрованной бумаги, наливают реактив 1 по 7.2.9.1 и выдерживают в течение 1-2
мин. Краску сливают, бумагу снимают и. не промывая препарата водой, наливают раствор
Л
юголя
(реактив 2 по 7.2.Э.2). Выдерживают в течение 1-2 мин до почернения препарата. Сливают раствор
Л
юголя и прополаскивают препарат в 96 %-ном спирте в течение 0,5-1,0 мин, пока не перестанет от
ходить краситель. Промывают тщательно дистиллированной водой, а затем дополнительно окраши
вают в течение 2 мин спирто-водным раствором фуксина (реактив 3) no 7.2.9.3. Промывают водой,
высушивают и микроскопируют.
8.2.4.2 Окраска по Граму в модификации Калины
На чистое, хорошо обезжиренное предметное стекло наносят петлей небольшое количество
агаровой культуры, но не размешивают. Приготавливая препарат из бульонной культуры, на стекло
наносят только ее каплю. Затем в каплю агаровой или бульонной культуры вносят петлей каплю ре
актива 4 по 7.2.10.1, смешивают и распределяют на площади приблизительно 1 см2, подсушивают
при комнатной температуре и фиксируют, проводя медленно один раз через пламя горелки. На одном
стекле можно готовить несколько мазков, отделяя их линиями, проведенными с обратной стороны
стекла.
После остывания стекла на препарат наносят реактив 5 по 7.2.10.2 таким образом, чтобы реак
тив покрыл всю поверхность стекла. Окрашивают в течение 0,5-1,0 мин. краску сливают, мазок по
мещают на 1-2 с в 30 %-ный этиловый спирт, затем препарат ополаскивают дистиллированной во
дой. высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют с иммерсионной системой.
Микроорганизмы, красящиеся по Граму (грамположительные), окрашиваются в темно-
фиолетовый цвет, не красящиеся по Граму (бактерии грамотрицательные — группы кишечной палоч ки)
— в красный цвет.
В зависимости от количества микроорганизмов в 1 см3 неразбавленной спермы и коли-титра
различают пять степеней чистоты спермы в соответствии с показателями, указанными в таблице 2.
Т а б л и ц а 2
С те п е н ь ч и с то ты
сп е р м ы
К о л и ч е с т в о м и к р о б н ы х те л
1
в 1 см
К о л и -ти тр , с м ’
С а н и т а р н а я о ц е н ка
ка ч е с т в а с п е р м ы
i
-
Св. 0,1 или 0.3
Стерильная
и
До 100
0.1 или 0.3
Незначительно загрязненная
i
n
До 2000
0.1 или 0,3
Слабо загрязненная
IV
До 5000
0.1 или 0,3
Средне загрязненная
V
Более 5000
0,01 или менее 0,3
Сильно загрязненная
11