ГОСТ 32011—2013
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ ISO 7218. а также следующий термин ссоот
ветствующим определением:
3.1 oscherichia coll 0157 (Е. coli 0157): Микроорганизмы, дающие типичный рост на поверхности
селективного агара, образующие индол испецифическим образом агглютинирующие с антисывороткой к
антигену 0157.
П р и м е ч а н и я .
^ Сорбит-попожительные штаммы Е. coli 0157 не обнаружены в среде CT-SMAC (5.2).
2 Обнаружены некоторые индол-отрицательные мутации.
4 Сущность метода
Обнаружение Escherichia coli 0157 связано с обязательным использованием четырех последова
тельных стадий (см. приложение А):
- обогащение пробы для анализа, гомогенизированной в модифицированном триптон-соевом
бульоне, содержащем новобиоцин (mTSB ♦ N). с инкубацией при температуре (41,5 ± 1) °С в течение 6 ч, а
затем еще в течение 12— 18 ч;
- сепарация и концентрация микроорганизмов с помощью иммуномагнитных частиц, связанных с
антителами к палочке Е. coli 0157;
- выделение путем пересева иммуномагнитныхчастиц с налипшими бактериями на агаровую сре
ду Мак-Конки, в которую добавляют сорбит и суплемент СТ (цефиксим и теллурит калия) (CT-SMAC). и
на выбранную заказчиком вторую селективную агаровую среду для выделения;
- подтверждение сорбит-негативных колоний на среде CT-SMAC и колоний, типичных для
Е.coli 0157. на второй агаровой средедля выделения в результате образования индола иагглютинации с
антисывороткой к Е. coli 0157.
П р и м е ч а н и е — Определение других характеристик положительных штаммов, например с помощью па
тогенных маркеров, возможно после их передачи в соответствующую референтную лабораторию.
5 Питательные среды, реактивы и антисыворотки
Общие правила микробиологических исследований — по ГОСТ ISO 7218.
5.1 Обогатительная среда (модифицированный триптон-соевый бульон с новобиоцином
(mTSB + N)
Состав:
Ферментативный перевар казеина................................17,0 г
Ферментативный перевар сои......................................... 3.0 г
0(+)-глюкоза...................................................................... 2.5 г
Желчные соли No. 3 .........................................................1.5 г
Хлорид натрия...................................................................5.0 г
Моногидрофосфат калия (К2НР04) ................................4,0 г
Дистиллированная вода................................................... 1 000 см3
5.1.1 Приготовление среды
Растворяют компоненты или готовую дегидратированную питательную среду в воде, при необхо
димости подогревают. Устанавливают уровень pH, используя pH-метр (см. 6.6). если необходимо, так.
чтобы после стерилизации он соответствовал pH (7.4
а
0.2) при температуре 25 °С.
Разливают среду в соответствующих количествах в колбы или склянки (6.7).
Стерилизуют в течение 15 мин в автоклаве (см. 6.1) при температуре 121 °С.
5.1.1.1 Раствор новобиоцина
Состав:
Новобиоцин ......................................................................0.45 г
Дистиллированная вода...................................................100 см
Приготовление раствора:
Растворяют новобиоцин в водо и стерилизуют фильтрованием через микропористую мембрану.
Готовят раствор перед определением.
2