ГОСТ 32011—2013
9.3.3 Сопарация
Устанавливают каждую полипропиленовую пробирку типа Эппвндорф (см. 9.3.2) в магнитный шта
тив (см. 6.12) и дают магнитным частицам скопиться около магнита, слегка покачивая штатив на 180°.
Осторожно открывают колпачок, стараясь не задеть частицы на стенке пробирки. Используя каждый раз
новую стерильную пипетку Пастера (см. 6.10) для каждой пробы, с пробиркой в магнитном штативе, уда
ляют жидкость, медленно отсасывая ее со дна пробирки. Добавляют 1 см1стерильного промывочного
буфера (см. 5.8) и закрывают колпачком. Удаляют магнит из штатива. Перемешивают содержимое про
бирок, осторожно поворачивая штатив на 180е, и затем возвращают магнит на штатив.
Следует соблюдать осторожность, чтобы избежать перекрестного загрязнения при добавлении
свежего буфера.
Продолжают процедуру, как описано выше, чтобы удалить промывочную жидкость новой пипеткой
Пастера для каждой пробы. Повторяют процедуру промывки несколько раз.
Вынимают из магнитного сепаратора, добавляют 0.1 см3 стерильного промывочного буфера в про
бирку и ресуспендируют магнитные частицы.
П р и м е ч а н и е — Эту процедуру трудно применять к жирным продуктам или свежим сырам.
9.4 Посев на чашки с селективным агаром и идентификация колоний Е. coli 0157
9.4.1 Посев на чашки
С помощью механического пипеттора (см. 6.11) переносят 0,05 см1промытых и ресуспендирован-
ных магнитных частиц на предварительно высушенную чашку с агаровой средой Мак-Конки с сорбитом
и суплементом СТ (цефиксим и теллурит калия) (см. 5.2). а также 0.05 см3на предварительно высушен
ную чашку со второй селективной средой для выделения микроорганизмов (см. 5.3).
Делают посев частиц штрихом, используя стерильную петлю (см. 6.10). для получения множества
хорошо изолированных колоний на поверхности агара.
Инкубируют посевы в термостате CT-SMAC при температуре 37 °С в течение 18—24 ч. а также ин
кубируют вторую селективную среду для выделения при тех же температуре и времени.
В зависимости от типа пищевой пробы и ее микробиологической обсемененности инкубация в те
чение 20—24 ч может привести к бурному росту других бактерий на чашках с селективным агаром, что
затруднит обнаружение колоний Е. coli 0157.
Посев на селективные среды препаратов с большими разведениями для иммуномагнитной сепа
рации или объемами меньше0,05 см3на чашку повышает возможность получения изолированных коло
ний Е. coli 0157.
9.4.2 Идентификация типичных колоний Е. coli 0157
На агаре Мак-Конки типичные колонии бывают прозрачными и почти бесцветными с бледными
желтовато-коричневыми проявлениями и диаметром приблизительно 1 мм.
Исследуют вторую селективную агаровую среду для выделения типичных колоний Е. coli 0157.
следуя инструкциям изготовителя.
9.5 Подтверждение идентификации
Можно использовать имеющиеся в продаже миниатюрные биохимические наборы для идентифи
кации сорбит-отрицательных и индол-лоложительных бактерий Е. сой и наборов для идентификации Е.
сой0157 методом латекс-агглютинации при условии, чтодля подтверждения проводятся соответству
ющие тесты с известными положительными и отрицательными штаммами.
9.5.1 Отбор колоний
С каждойчашки отбирают пятьтипичных колоний, как указано в 9.4. Если чашка с агаром содержит
менее 5 типичных колоний, необходимо исследовать все колонии.
Засевают штрихом каждую выбранную колонию на чашку с питательным агаром (см. 5.4), чтобы
дать возможность разрастись хорошо выделенным колониям.
Инкубируют (см. 6.3) чашки в течение 18—24 ч при температуре 37 °С.
Для тестов используют толькочистыекультуры изчашки с питательным агаром, какописано в 9.5.2
и 9.5.3.
9.5.2 Биохимическая идентификация (образование индола)
Инокулируют одну колонию чистой культуры с питательного агара (см. 9.5.1) в пробирку с трип-
тон/триптофановой средой (см. 5.5).
Инкубируют (см. 6.3) при температуре 37 °С в течение 24 ч.
7