ГОСТ 32011—2013
6.12 Магнитный сепаратор с магнитным штативом, для концентрации иммуномагнитных частиц,
применяемый для пробирок (см. 6.13).
6.13 Пробирки полипропиленовыетипа Эппендорф. с навинчивающимся колпачком, стерильные,
одноразовые, центрифужные, вместимостью 1.5 см3, подходящие для магнитного штатива.
Следует избегать образования аэрозолей при открытии.
6.14 Роторный смеситель (работающий в режиме авторотации, смеситель проб крови), вращаю
щийся со скоростью от 15 до 20 об/мин.
6.15 Чашки Петри, диаметром 90 мм и 140 мм.
6.16 Смеситель типа Вортекс.
7 Отбор проб
Отбор проб проводят в соответствии с ГОСТ 26668. Рекомендуется перед хранением пробу
быстро остудить.
Влабораторию направляют представительную пробу, которая не должна быть повреждена или
изменена в процессе транспортирования или хранения.
8 Подготовка проб
Подготовку проб проводят в соответствии с [1). ГОСТ 26669.
9 Методика проведения испытания по схеме, приведенной в приложении А
9.1 Проба для анализа и исходная суспензия
Для приготовления исходной суспензии пробу для анализа (г или см3) добавляют к модифициро
ванному триптон-соевому бульону с новобиоцином (mTSB + N) объемом 9 см3или массой 9 г.предвари
тельно нагретого в инкубаторе до температуры 41,5 °С, чтобы проба для анализа была в соотношении с
mTSB + N как 1/10 (масса к объему или объем к объему).
Рекомендуется использовать пакеты Стомахер с сетчатыми вставкамидля снижения интерферен
ции пищевых частиц с набором реактивов для иммунозахвата (см. 9.3).
9.2 Обогащение
Инкубируют (см. 6.4) исходную суспензию, приготовленную в соответствии с 9.1, при температуре
41,5 "С в течение 6 ч. а затем еще в течение 12—18 ч (фактическая продолжительность от 18 до 24 ч).
6-часовая инкубация, за которой следует иммуномагнитная сепарация и посев на чашки с селек
тивным агаром, может дать положительный результат обнаружения презумптивных бактерий, который
может стать отрицательным после дальнейшей 18-часовой инкубации.
9.3 Иммуномагнитная сепарация
9.3.1 Общие требования
Иммуномагнитнуюсепарацию следует проводитьспустя 6 ч после инкубации и еще раз. если необ
ходимо. после 12—18 ч инкубации.
Для иммунозахвата необходимо следовать инструкциям изготовителя в отношении методики и ме
тода применения набора реактивов и оборудования.
9.3.2 Иммунозахват
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! — Используют только асептические методы, чтобы избежать любого
внешнего загрязнения и образования аэрозолей. Выполняют эту процедуру в защищенной от за
грязнений камере, если имеется. Работают в перчатках.
Используя магнитный сепаратор (см. 6.12) и иммуномагнитныечастицы, связанныесантителами к
Е. coli 0157, выполняют следующую процедуру захвата/сепарации.
Смешивают обогатительную культуру (см. 9.2) и оставляют для осаждения всех крупных пищевых
частиц. В полипропиленовую пробирку типа Эппендорф (см. 6.13) добавляют 20 мкл подготовленных
иммуномагнитных частиц (5.7) при комнатной температуре. Отделяют 1см3верхнего слоя жидкости от
обогатительной культуры, стараясь, по возможности, избегать попадания любых пищевых частиц или
жировых включений, и переносят в полипропиленовую пробирку типа Эппендорф.
Перемешивают суспензию в роторном смесителе (см. 6.14) со скоростью вращения приблизитель
но от 12 до 20 об/мин в течение 10 мин.
6