ГОСТ 32043-2012
Рабочие растворы анализируют на жидкостном хроматографе при следующих условиях.
• колонка хроматографическая 2 х 64 (2 * 80, 2 * 120) мм с сорбентом;
- элюент трехкомпонентный по 5.3.1;
• объем пробы - 6 мм3;
• длина волны - 286 нм;
• постоянная времени - 0,2 с;
• скорость подачи элюента -100 мм3/мин.
Удерживаемый объем пика витамина Е составляет 540-660 мм3 (может меняться в зависимости
от длины колонки).
Каждый раствор хроматографируют два раза. После выхода пика колонку промывают, прокачи
вая через нее 200-250 мм3элюента до выхода на нулевую линию.
Средние значения высот хроматографических пиков (в единицах оптической плотности или
миллиметрах) откладывают по оси ординат градуировочного графика, а по оси абсцисс - значения
содержания витамина Е в микрограммах в 25 см3раствора.
Построение градуировочных графиков можно заменить расчетом коэффициента наклона, К.
мг/е.о.п. или мг/мм. по формуле
л
I*.
-----
■(4)
п
где п - количество точек, по которым строится градуировочный график;
Ккоэффициент наклона градуировочного графика для i-ro градуировочного раствора, мг/е.о.п.
или мг/мм.
Значение коэффициента наклона градуировочного графика для i-ro градуировочного рас
твора. К„ мг/е.о.п. или мг/мм, вычисляют по формуле
К, = £ .(5)
It.
где С /- содержание витамина Е в соответствующем i-ом градуировочном
растворе, мг.
h,~ высота i-ro хроматографического пика, е.о.п. или мм.
5.3.8 Проверка градуировочных графиков
Градуировочные графики контролируют не реже одного раза в неделю. Для этого 1-2 стандарт
ных рабочих растворов витаминов А, Е следует хроматографировать по 5.3.6 и 5.3.7. Отклонение по
лученных результатов (высота пика, выраженная в единицах оптической плотности или
миллиметрах) от измеренных в момент построения градуировочного графика, а. %. определяют по
формуле
It. -А ,
А,
а- —--------
•
100
,
(
6
)
где А,. Лг- высотыхроматографических пиков, определенные при построении
градуировочного графика и вмомент проверки соответственно, е.о.п.
или мм;
100 - коэффициент пересчета в проценты.
При отклонении полученных результатов более чем на 5 % строят новый градуировочный график
посвежеприготовленным стандартным растворам препаратов витамина А и витамина Е.
5.4 Проведение испытания
5.4.1 Экстракция витаминов А, Е из премиксов
В соответствии с таблицей 1 взвешивают анализируемую пробу премикса с погрешностью ±
0.001 г, затем помещают ее в коническую колбу со шлифом вместимостью 25 см3 или 50 см3 и прили
вают соответствующий объем экстрагента (см. 5.3.3).
5