ГОСТ 32043-2012
Натрий сернокислый безводный по ГОСТ 4166.
Стандартный образец витамина А (ретинола ацетата), содержащий не менее 1 млн. ME витами
на А в 1 г.
Стандартный образец витамина Е (токоферола ацетата) с массовой долей не менее 99.0 %.
Стандартный образец витамина(эргокальциферола) с массовой долей не менее 99,0 %.
Алюминия окись для хроматографии, нейтральная.
Гидрохинон по ГОСТ 19627.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Бумага индикаторная.
Фильтры обеззоленные (красная лента).
П р и м е ч а н и я
1 Допускается использование других средств измерений и оборудования с техническими и метрологиче
скими характеристиками не ниже указанных.
2 Все реактивы должны быть квалификации х. ч. или ч. д. а.
3 Допускается использование других материалов с характеристиками не ниже указанных.
6.3 Подготовка к измерению
6.3.1 Определение содержания витамина А в стандартном образце по 5.3.5.
6.3.2 Получение абсолютного спирта по 5.3.4.
6.3.3 Приготовление стандартного раствора витамина А
Стандартный образец витамина А массой, необходимой для приготовления раствора с содер
жанием витамина 10000 МЕ/см3, переносят в мерную колбу вместимостью 25 см3и растворяют в изо
пропиловом спирте. Раствор перемешивают и доводят объем до метки спиртом. Хранят в холодиль
нике в склянке с притертой пробкой и используют в течение одной недели.
6.3.4 Приготовление стандартного раствора витамина 02(эргокальциферола)
Ампулу (капсулу), содержащую 0.1 г витамина D2. помещают в мерную колбу вместимостью 100
см3. Доводят содержимое колбы до метки изопропиловым спиртом и перемешивают. Полученный рас
твор 1 содержит 40000 МЕ/см3 витамина D2. Из него берут 1 см3 раствора, помещают в мерную колбу
вместимостью 50 см3, доводят до метки этим же спиртом и перемешивают. Полученный раствор 2
содержит 800 МЕ/см3витамина Д..
Срок хранения раствора в стеклянной емкости с притертой пробкой в холодильнике - не более
одной недели.
6.3.5 Приготовление стандартного раствора витамина Е
0,05 г стандартного образца витамина Е переносят в мерную колбу вместимостью 25 см3, рас
творяют в изопропиловом спирте, доводят им объем до метки и тщательно перемешивают.
Срок хранения раствора в стеклянной емкости с притертой пробкой в холодильнике - не более
одной недели.
6.3.6 Подготовка растворителей
Очистку растворителей, применяемых в хроматографии, проводят посредством перегонки, от
брасывая первую и последнюю фракции в количестве 1/10 от первоначального объема, или пропус
канием через колонку, заполненную активированной окисью алюминия.
Окись алюминия активируют при нагревании в течение 1 ч при температуре 400 еС - 450 “С. Ко
лонку высотой 60-80 см и диаметром 2 см заполняют 80 г активированной окиси алюминия и пропус
кают через нее 700 см3 растворителя. Для проверки чистоты в колонку жидкостного хроматографа
загружают 50 мм3 растворителя. В случае его загрязнения на хроматограмме появляются пики, соот
ветствующие времени удерживания витаминов A. D. Е.
6.3.7 Приготовление водно-спиртового раствора гидроокиси калия с массовой долей 10 %
Растворяют 20 г гидроокиси калия в смеси из 20 см3 воды и 180 см3этилового спирта. Раствор
готовят непосредственно перед контролем.
6.4 Проведение испытания
6.4.1 Омыление и подготовка к контролю стандартных растворов витаминов A, D, Е
В конические колбы вместимостью 250 см3, снабженные холодильником, помещают 0.25 см3
раствора витамина А по 6.3.3.1 см3 раствора витамина D2 по 6.3.4 (раствор 2), 0.2 см3раствора вита
мина Е по 6.3.5. В каждую колбу добавляют 0.1 г гидрохинона. 30 см3 10 %-ного водно-спиртового
раствора гидроокиси калия и подвергают омылению в течение 30 мин на водяной бане при
температуре 85 5С. Колбы охлаждают до комнатной температуры под струей холодной воды и
добавляют по 30 см3дистиллированной воды и по 30 см3гексана. Полученные смеси тщательно
перемешивают и переносят в делительные воронки вместимостью 200 см3.
8