ГОСТ 32043-2012
5.3.6 Построение градуировочного графика для витамина А
Для приготовления основного стандартного раствора взвешивают стандартный образец вита
мина А массой, необходимой для получения раствора с содержанием этого витамина 600 МЕ/см3,
помещают его в мерную колбу вместимостью 50 см3, растворяют в изопропиловом спирте,
переме шивают и доводят этим спиртом до метки.
Срок хранения основного стандартного раствора в емкости с притертой пробкой в холодильнике при
температуре 4 °С - 10°С - не более одной недели.
Из этого раствора готовят градуировочные (рабочие) растворы, содержащие 120, 300. 600. 1200.
3000. 6000, 12000 ME витамина А в 25 см3раствора. Для этого берут соответственно 0.2; 0,5; 1,0; 2,0;
5.0: 10,0 и 20.0 см3 основного стандартного раствора, помещают в мерные колбы вместимостью 25
c m j
и доводят объемы до метки изопропиловым спиртом.
Срок хранения градуировочных (рабочих) растворов в емкостях с притертыми пробками, в холо
дильнике при температуре 4 °С -1 0 вС - не более 1 мес.
Полученные рабочие растворы анализируют на жидкостном хроматографе при следующих
условиях:
• колонка хроматографическая 2 х 64 (2 х 80. 2 * 120) мм с сорбентом;
• элюент трехкомпонентный по 5.3.1;
• объем пробы - 6 мм3;
• длина волны - 328 нм;
• постоянная времени - 0.2 с;
• скорость подачи элюента - 150 мм3/мин.
Удерживаемый объем пика витамина А составляет 300-360 мм3(может меняться в зависимости
от длины колонки).
Каждый раствор хроматографируют два раза. После выхода пика колонку
промывают, прокачивая через нее 100-200 мм3элюента до выхода на нулевую
линию.
Средние значения высот хроматографических пиков, выраженные в единицах оптической плот
ности или в миллиметрах, откладывают по оси ординат градуировочного графика, а по оси абсцисс -
значения содержания витамина А. ME. в 25 см3раствора.
Построение градуировочных графиков можно заменить расчетом коэффициента наклона. К.
МЕ/е.о.п. или МЕ/мм. по формуле
где п - количество точек, по которым строят градуировочный график;
К, - коэффициент наклона градуировочного графика для / го градуировоч
ного раствора, МЕ/е.о.п. или МЕ/мм.
Значение коэффициента наклона градуировочного графика для i-ro градуировочного раствора,
К,, МЕ/е.о.п. или МЕ/мм. вычисляют по формуле
гдеС, - содержание витамина А в соответствующем / ом градуировочном растворе. ME;
/),- высота /-го хроматографического пика, е.о.п. или мм.
5.3.7 Построение градуировочного графика для витамина Е
Взвешивают на весах (0.020 ± 0.001) г стандартного образца витамина Е. затем растворяют в
изопропиловом спирте в мерной колбе вместимостью50 см3, объем доводят спиртом до мет
ки и перемешивают. Получают основной стандартный раствор витамина Е с массовой концентрацией
0.4 мг/см3.
Из полученного основного стандартного раствора готовят градуировочные (рабочие) растворы,
содержащие 7.0; 5.0; 3,0; 1,0; 0.5: 0.1 и 0,05 мг витамина Е в 25 см’ раствора. Для этого соответственно
17.5; 12.5:7.5:2.5:2,25; 1.25; 0.25; 0,125 см3 основного стандартного раствора помещают в мерные
колбы вместимостью 25 см3 и объемы доводят до мотки изопропиловым спиртом.
0.0310-0.0378 г (90000-110000 ME): 0.0619-0,0757 г (180000-220000 ME);
0.0774-0.0946 г (225000-275000 ME).
Полученные результаты ислользуют для расчета содержания витамина А в стандартном рас
творе.
(
2
)
(3)
4