ГОСТ 32043-2012
1 Допускается использование других средств измерений и оборудования с техническими и метрологиче
скими характеристиками не ниже указанных.
2 Все реактивы должны быть квалификации х. ч. или ч. д. а.
3 Допускается использование других материалов с характеристиками не ниже указанных.
5.3Подготовка к проведению испытания
5.3.1 Приготовление элюента для хроматографии
Трехкомпонентный элюент готовят смешиванием ацетонитрила, пропилового спирта и дистил
лированной воды в объемном соотношении 42 : 50 : 8. Для этого в склянку вместимостью 1000 см3
вносят цилиндром 500 см3пропилового спирта. 420 см3ацетонитрила и 80 см3дистиллированной во ды.
Приготовленную смесь растворителей фильтруют через стеклянный фильтр и помещают в
стеклянную емкость с притертой пробкой.
Срок хранения раствора при комнатной температуре - не более 1 мес.
5.3.2 Подготовка хроматографической колонки
При использовании новой колонки или колонки после длительного перерыва в работе из нее
следует удалить воздух и тщательно промыть элюентом до получения стабильной нулевой линии.
Для этого через колонку пропускают элюент в количестве 20-30 свободных объемов колонки, т.е. два
полных шприца насоса хроматографа при расходе элюента сначала 50 мм3/мин, а затем100
мм3Ляин. Промывку колонки заканчивают при получении стабильной нулевой линии.
После промывки колонки проводят ее насыщение витаминами А. Е. Для насыщения колонки в
начале работы проводят 7-10 загрузок наиболее концентрированного градуировочного (рабочего)
раствора (см. 5.3.6 или 5.3.7) и отмечают высоты ликов. Насыщение колонки проводят до достижения
постоянной высоты пиков (отношение разности между двумя последовательными определениями
концентрации витамина к среднему арифметическому значению этих операций не более 3 % отн.).
5.3.3 Приготовление растворителя для экстракции витаминов А, Е
Двухкомпонентный экстрагент готовят смешиванием изопропилового
спирта и дистиллированной воды в объемном соотношении 97 : 3. Для этого в мерную колбу
вместимостью 1000 см3 вносят пипеткой 30 см3 дистиллированной воды, объем доводят до метки
изопропиловым спиртом.
Срок хранения экстрагента в стеклянной емкости с притертой пробкой не ограничен.
5.3.4 Получение абсолютного спирта
В колбу вместимостью 500
c m j в н о с я т
(30 ± 1) г окиси кальция, добавляют 250 см3этанола и ки
пятятсхолодильникомтипаХШвтечение
6-8 ч. Затем этанол перегоняют при температуре 64.7 °С.
5.3.5 Определение массовой концентрации витамина А в стандартном образце
Взвешивают (0.100 ± 0.002) г стандартного образца витамина А. затем растворяют в абсолют
ном спирте в мерной колбе вместимостью 50 см3.
Доводят этим же спиртом объем раствора в колбе до метки и перемешивают. Отбирают 1-2 см3
полученного раствора в мерную колбу вместимостью 50 см3, доводят объем до метки абсолютным
спиртом и измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре при длине
волны 326 нм в кювете толщиной слоя 1 см. В качестве контрольного раствора применяют абсолют
ный спирт.
Массовую концентрацию витамина А. X, г/см3, определяют по формуле
DV. V,
•р
-
— ——
m V
Х =
---------
НИ) 1550
,
(1)
гдеD - оптическая плотность раствора витамина А. е.о.п.;
1/, - первоначальный объем разведения раствора стандартного образца
витамина А. см3;
V2- окончательный объем разведения раствора стандартного образца
витамина А. см3;
р - плотность стандартного образца витамина А. г/см3;
т - масса стандартного образца витамина А. г;
V-объем раствора витамина А. используемыйдля второго разведения, см3;
100 - коэффициент пересчета;
1550 -удельный показатель поглощения£,‘2,при длине волны 326 нм для
100 %-ного раствора витамина А в абсолютном спирте.
Содержание витамина А в 1 см3 соответственно должно быть
3