ГОСТ 32043-2012
После расслаивания нижние слои (водно-спиртовые) сливают в конические колбы, а гексановые
слои оставляют в делительной воронке. Экстракцию гексаном водно-спиртовых слоев в конической
колбе проводят еще дважды, каждый раз сливая в делительную воронку гексановый слой.
Гексановые вытяжки объединяют и промывают в делительной воронке дистиллированной водой
порциями по 30 см3до нейтральной реакции среды (проверяют по индикаторной бумаге). Промытые
экстракты переносят в сухие перегонные колбы, пропуская их через бумажные фильтры со слоем
безводного сульфата натрия (около 50 г). Делительные воронки и фильтрующие материалы промы
вают свежими порциями гексана по 20-30 см3.
Все гексановые растворы каждого стандартного раствора витамина объединяют и переносят в
колбы роторного испарителя. Температура водяной бани роторного испарителя 70 °С. После отгонки
гексана полученные сухие остатки растворяют в 3 см3 гексана и переносят в предварительно отка
либрованные мерные пробирки с притертыми пробками. Растворы хранят в темном месте при темпе
ратуре 4 X - 8 гС.
6.4.2 Омыление и подготовка образцов премиксов к хроматографиро-ванию
(10,000 ± 0,001) г анализируемой пробы премикса помещают в коническую колбу вместимостью
250 см3, снабженную обратным холодильником. Добавляют антиоксидант (0.1 г гидрохинона). 50 см3
водно спиртового раствора щелочи и подвергают омылению на водяной бане при температуре
82 °С - 85 еС в течение 30 мин.
По окончании омыления колбу охлаждают до комнатной температуры, добавляют 50 см3 ди
стиллированной воды и 50 см3 гексана, смесь тщательно перемешивают и дают отстояться. После
расслаивания смеси гексановый слой осторожно сливают в делительную воронку вместимостью 500
см3.
Экстракцию гексаном повторяют дважды порциями по 50 см3, последнюю фракцию переносят в
делительную воронку, сливая содержимое колбы через воронку с марлевым слоем. Остаток на марле
слегка отжимают стеклянной палочкой и выбрасывают. Воронку обмывают дистиллированной водой
(около 50 см3) в делительную воронку, в которой собраны гексановые вытяжки. Содержимое дели
тельной воронки промывают дистиллированной водой порциями по 50 см3 до нейтральной реакции
среды (по индикаторной бумаге). Промытый экстракт переносят в сухую перегонную колбу, пропуская его
через обеззоленный фильтр, заполненный безводным сульфатом натрия (около 50 г). Делитель ную
воронку и фильтр промывают 40 см3 гексана. Отгоняют гексан на ротационном испарителе при
температуре бани 70 еС. Сухой остаток растворяют в 3
c m j
гексана, который добавляют порциями, чтобы
перенести в предварительно откалиброванную пробирку с притертой пробкой.
Полученный экстракт используют для хроматографического анализа.
6.4.3 Подготовка жидкостного хроматографа к работе
Подготовка хроматографа осуществляется в соответствии с инструкцией по эксплуатации при
бора.
Перед началом измерений хроматограф прогревают в течение 15 мин. Сначала проводят за
полнение насоса элюентом. В качестве подвижной фазы используют смесь гексана с этанолом в со
отношении 99.5 : 0.5 по объему. Устанавливают скорость элюирования, соответствующую эффектив
ности колонки для конкретных премиксов от 0.5 до 2.0 см3/мин. При определении содержания вита
минов А. Е устанавливают светофильтрдлиной волны 289 нм. для определения содержания витамина Ск -
саетофильтр длиной волны 254 нм. Скорость движения диаграммной ленты регистратора устанавлива ют
равной 0.3-0.6 см/мин.
После промывания колонки элюентом регистрирующий прибор должен показывать стабильную
нулевую линию. С целью повышения чувствительности и точности измерений для каждого хромато
графа подбирают оптимальные условия хроматографирования.
Для насыщения колонки в начале работы проводят по 7-10 загрузок стандартных растворов и
отмечают высоты пиков. При достижении постоянной высоты можно приступить к испытаниям.
6.4.4 Проведение хроматографических измерений
Для хроматографических измерений используют метод сравнения со стандартом. Сравнивают
высоты хроматографических пиков для анализируемой пробы и пробы стандарта.
В колонку последовательно вводят от 3 до 20 мм3анализируемого раствора, стандартного рас
твора витамина А и стандартного раствора витамина Е. Получают соответствующие хроматограммы
при длине волны фотометрического детектора 289 нм (приложение А. рисунок А.2). После этого ме
няют светофильтр, устанавливая рабочую длину волны 254 нм. и при этих условиях снимают хрома
тограммы для растворов анализируемой пробы и стандартного раствора витамина D2, (приложение А,
рисунок А.З).
Высоты пиков, соответствующие времени удерживания витаминов A. D2, Е. измеряют как рас
стояние от вершины пика до линии, проведенной в основании пика. Значения высот пиков в единицах
9