ГОСТ Р 55293-2012
Реакционную смесь инкубируют при температуре (50 ± 1) "С в течение 5 мин,
ведя отсчет с момента начала ферментативной реакции.
4.5.1.3 По окончании реакции в пробирки вносят по 1 см3 реактива
Шомодипо 4.3.2, тщательно перемешивают, закрывают стеклянными
пробками, помещают в кипящую водяную баню на 20 мин.
4.5.1.4 Пробирки охлаждают в холодной воде, добавляют 1,0 см3
реактива Нельсона по 4.3.3 и выдерживают в течение 10 мин., периодически
тщательно перемешивая. Полученные растворы приобретают синюю или
бирюзовую окраску различной интенсивности. При образовании осадка или
мути в пробирки добавляют по 1см3ацетона и перемешивают до полного их
исчезновения. В этом случае ацетон добавляют в пробирки контрольного
раствора на реактивы по 4.5.2 и раствора субстрата по 4.5.3.
4.5.1.5 Содержимое пробирок доводят до общего объема 10 см3
дистиллированнойводойиизмеряютоптическуюплотность/)ф на
фотоэлектроколориметре или спектрофотометре при длине световой волны
610 нм в кюветах с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм против
контрольного раствора на реактивы по 4.5.2. Значение Д+, должно быть в
диапазоне 0,3 - 0,6 ед. оптической плотности.
4.5.1.6 Если значение оптической плотности опытной пробы Д|>
находится за пределами рабочей зоны градуировочного графика и не
укладывается в диапазон ее значения, определение активности следует
повторить с рабочим раствором анализируемой пробы, содержащей большее
или меньшее количество фермента соответственно.
4.5.2Определение оптической плотности контрольного раствора на
реактивы
ИзмеренияоптическойплотностиопытнойпробыДф, раствора
субстрата Dcи рабочего раствора фермента D0осуществляют против кюветы
с контрольным раствором на реактивы. Контрольный раствор на реактивы
готовят, внося в пробирку 0.5 см’ ацетатного буферного раствора по 4.3.1,
0,5 см3 дистиллированной воды и 1 см3 реактива Шомоди по 4.3.2.
14