ГОСТ Р 55293-2012
4.4.3Приготовление рабочего раствора анализируемой пробы
ферментного препарата
Рабочий раствор анализируемого ферментного препарата готовят из
основного раствора по 4.4.2 путем дальнейшего разведения его дистиллиро
ванной водой таким образом, чтобы при определении активности оптические
плотности опытного и контрольного растворов находились в пределах
рабочей зоны градуировочного графика по 4.3.6.
Количество фермента, взятого на анализ, должно быть рассчитано так,
чтобы в реакционной смеси по 4.5.1.2 присутствовал избыток субстрата и
чтобы измеряемые величины оптической плотности Dф по 4.5.1.5 при
колориметрировании в кювете с толщиной поглощающего светового слоя
10 мм лежали в диапазоне значений 0,3 - 0,6 ед. оптической плотности.
Приотклоненииоптическойплотностиот указанныхзначений
необходимоподобратьразведениепрепарататакимобразом,чтобы
оптическая плотность окрашенных растворов Dl() по 4.5.1.5 соответствовала
указанным пределам диапазона.
Каждую пробу анализируют два раза в условиях повторяемости в
соответствии в требованиями ГОСТ Р ИСО 5725-1 и ГОСТ Р ИСО 5725-2.
Раствор готовят в день определения. Длительность использования
рабочего раствора ферментного препарата не должна превышать 1 ч с
моментаприготовлениявоизбежаниепотерьегоферментативной
активности.
4.5 Проведение анализа
4.5.1 Проведение ферментативной реакции
4.5.1.1 В две пробирки (16 х 150 мм) вносят по 0,5 см’ субстрата КМЦ
по4.3.4.Содержимоепробирокперемешиваютипрогреваютв
ультратермостате с температурой (50 ± 1) °С в течение 5 мин.
4.5.1.2Впробиркидобавляютпо0,5см3 рабочегораствора
анализируемой пробы ферментного препарата по 4.4.3, предварительно
прогретого до температуры (50 ± 1) °С, и тщательно перемешивают.
13