ГОСТ 31708— 2012
9.2 Метод количественного определения
9.2.1 Приготовление пробы и первичного разведения в зависимости от вида продукта по ГОСТ
26669.
Подготавливают достаточное число разведений, чтобы в максимальном разведении с уверенно
стью получить отрицательный результат.
9.2.2 Инокуляция и инкубация селективного обогатительного бульона (бульона с лаурил-
сульфатом)
9.2.2.1 Подготавливают ряд последовательных разведений, по три пробирки на каждое разведе
ние. Для проб живых моллюсков и некоторых других особых продуктов, а также для получения большей
точности результатов необходимо использовать по пять пробирок на каждое разведение (см. приложе
ние А).
9.2.2 2 Берут три пробирки с селективной обогатительной средой двойной концентрации [см. та
блицу 1 а)] и. используя стерильную пипетку (см. 6.7). в каждую пробирку вносят по 10 см3первичного
разведения. Таким образом, каждая пробирка этого ряда будет содержать по 1 г образца.
9.2.2.3 Берут три пробирки с селективной обогатительной средой одинарной концентрации [см.
таблицу 1 Ь)) и. используя новую стерильную пипетку (см. 6.7). в каждую пробирку вносят по 1 см3
первичного разведения. Таким образом, каждая пробирка этого ряда будет содержать по 0.1 г образца.
3.2.2.4 Для каждого последующего разведения (соответствующего 0,01 г. 0.001 г и т.д. продукта на
пробирку) повторяют процедуру, как в 9.2.2.3. используя для каждого разведения новую пипетку. Ино
кулят и среду тщательно перемешивают.
3.2.2.5 Инокулированные среды с лаурилсульфатом двойной по 9.2.2.1 или одинарной концентра
ции по 9.2.2.3 и Э.2.2.4 инкубируют в термостате (см. 6.2) при температуре 37 °С в течение (24 ± 2) ч.
Если на этой стадии не обнаруживают ни газообразования, ни замутнения среды, затрудняющего опре
деление газообразования, продолжают инкубацию до (48 ± 2) ч.
Примечание — Время инкубации проб живых моллюсков должно составлять (48 ± 2) ч.
t
При исследовании некоторых молочных продуктов (например, казеина) пробирки-поплавки Даре
ма могут застревать на дне пробирки с селективной обогатительной средой. Если после 48 ч инкубации
в пробирке обнаруживают лишь помутнение без газообразования, то также осуществляют пересев в
EC-бульон согласно 9.2.3.
9.2.3 Инокуляция и инкубация селективной среды (ЕС-бульона)
9.2.3.1 При обнаружении помутнения, выпадения осадка или видимого газообразования после
инкубации селективной среды двойной концентрации [см. таблицу 1 а)] согласно Э.2.2.5 или при об
наружении видимого газообразования после инкубации селективной среды одинарной концентрации
[см. таблицу 1 Ь)) согласно 9.2.2.5 с помощью бактериологической петли (см. 6.5) проводят пересев в
пробирку с EC-бульоном (см. 5.3).
9.2.3.2
Инокулированный согласно
9.2.3.1
EC-бульон инкубируют на водяной бане
(
c
a
. 6.3)
или в
термостате (см.
6.2) (24 ± 2)
ч при температуре
44
°С. Если на этой стадии не обнаруживают видимого
газообразования в EC-бульоне (см.
5.3).
то общее время инкубации продлевают до
(48
±
2)
ч.
Примечание — Общее время инкубации проб живых моллюсков должно составлять (24 ± 2) ч.
9.2.4 Инокуляция и инкубация пептонной воды
При обнаружении видимого газообразования после инкубации согласно 9.2.3.2 с помощью бакте
риологической петли (см. 6.5) производят пересев в пробирку с пептонной водой (см .5.4), предвари
тельно прогретой до температуры 44 °С. Инкубируют (48 ± 2) ч при температуре 44 °С.
9.2.5 Обнаружение образования индола
В пробирку с пептонной водой (см. 5.4) после инкубации согласно 9.2.4 добавляют 0.5 см3 реак
тива на индол (см. 5.5). После интенсивного перемешивания через 1 мин проводят оценку реакции.
Красное окрашивание в спиртовой фазе свидетельствует о наличии индола.
9.2.6 Оценка результатов
При обнаружении видимого газообразования в пробирке с EC-бульоном и образования индола в
пробирке с пептонной водой (см. 9.2.2—9.2.4) селективную обогатительную среду оценивают как по
ложительную (презумптивная Escherichia coli обнаружена).
Для каждого разведения определяют число положительных результатов для среды двойной кон
центрации [см. таблицу 1а)] и одинарной концентрации [см. таблицу 1 Ь)].
6