ГОСТ 31717—2012
Мутные пробы дополнительно фильтруют (см. 6.3.1, 6.3.2). Сильноокрашенные пробы обрабатывают
поливинилполипирролидоном согласно 6.3.2.
В определении по 4.5 используют от 0,200 до 0,500 см3фильтрата.
6.4 Условия определения
Длина волны при фотометрическом измерении составляет 578 нм. Для измерения используют
стеклянную кювету’ >с толщиной оптического слоя 1 см, равной ширине грани. Ферментативное опреде
ление проводят при температуре 37 X . Общий объем инкубационной смеси в кювете составляет
2,70 см3.
Измерение оптической плотности инкубационной смеси проводят против воздуха (без кюветы в
световом пути прибора). Проба в инкубационной смеси в кювете должна содержать от 0.5 до 20 мкг ас
корбиновой кислоты в 0.1— 1,6 см3пробы.
6.5 Ферментативное определение
Ферментативное определение аскорбиновой кислоты в пробе проводят по схеме дозирования и
смешивания реактивов, приведенной в таблице 2. Если в определении используют иммобилизованную
АО и готовые наборы реактивов, дозирование и смешивание реактивов проводят по схеме таблицы 3.
Т а б л и ц а 2 — Схема дозирования и смешивания реактивов для ферментативного определения аскорбино
вой кислоты
Дозирование в кювету
Контрольная проба
Проба
Рабочий раствор МТТ11 (см. 6.2.2)
Дистиллированная вода
Проба1’1(см. 6.3)
Рабочий раствор АО (см. 6.2.4)
1.000 см3
1.490 см3
0.100 см3
0,01 см3
1.000 см3
1.500 см3
0.100 см3
—
Перемешивают. Помещают контрольную кювету и кювету с пробой в термостат при температуре 37 X . В те
чение 6 мин3’ интенсивно перемешивают содержимое кюветы с контрольной пробой пластиковой или стеклянной
палочкой с целью насыщения инкубационной смеси воздухом (необходимое условие полного окисления аскорби
новой кислоты в контрольной пробе!). После выдержки в контрольной кювете и в кювете с пробой измеряют зна
чение оптической плотности А.. Продолжают реакцию добавлением:
Рабочий раствор ФМС‘ >(см. 6.2.3)0.100 см30.100 см3
Перемешивают. Инкубируют (в темноте!) при температуре 37 X в течение 15 мин. после чего немедленно из
меряют значение оптической плотности А2в кювете с контрольной пробой и а кювете с пробой.
’> Температура раствора должна составлять 37 X .
2> Перед дозированием в кювету пипетку или наконечник дозатора следует ополоснуть фильтратом пробы
(см. 6.3).
3> При определении аскорбиновой кислоты в пробах, содержащих повышенные количества диоксида серы,
время выдержки кюветы с контрольной пробой увеличивают до 10 мин.
4> После внесения рабочего раствора ФМС кюветы изолируют от доступа света.
Т а б л и ц а 3 — Схема дозирования и смешивания реактивов для ферментативного определения аскорбино
вой кислоты при использовании иммобилизованной АО
Дозирование в кювету
Кожрольная проба
Проба
Рабочий раствор МТТ (см. 6.2.2)
Дистиллированная вода
Проба (см. 6.3)
Иммобилизованная АО
1.000 см3
1.500 СМ3
0.100 см3
Один шпатель
1.000 см3
1.500 см3
0,100 см3
—
Перемешивают. Помещают контрольную кювету и кювету с пробой в термостат при температуре 37 X . В те
чение 6 мин интенсивно перемешивают содержимое кюветы с контрольной пробой шпателем с иммобилизован ной
АО с целью насыщения инкубационной смеси воздухом (необходимое условие полного окисления аскорби новой
кислоты в контрольной пробе!). После выдержки в контрольной кювете и в кювете с пробой измеряют зна-чение
оптической плотности А2. Продолжают реакцию добавлением:
1’ Вместо кювет из оптического стекла допускается использование одноразовых кювет из полимерных мате
риалов.
5