ГОСТ 31717—2012
мание, что оптическую плотность А2 в кювете с контрольной пробой и в кювете с пробой необходимо
измерять непосредственно одну за другой.
Если разница оптических плотностей {А2—А,) контрольной пробы менее 0,020, то следует соблю
дать следующие правила: рабочий раствор МТТ должен храниться в темноте; при использовании рабо
чего раствора МТТ его нельзя подвергать прямому облучению солнечным или электрическим светом;
содержимое кюветы с контрольной пробой необходимо интенсивно перемешивать стеклянной или плас
тиковой палочкой (или шпателем с иммобилизованной АО) с целью насыщения инкубационной смеси
воздухом; после внесения в инкубационную смесь рабочего раствора ФМС кюветы с контрольной
пробой и пробой защищают от солнечного или электрического света.
8.4.3 Стабильность аскорбиновой кислоты
Водные растворы аскорбиновой кислоты нестабильны. При анализе твердых проб рекомендуется
проводить выделение аскорбиновой кислоты раствором метафосфорной кислоты концентрации 15
г/дм3. После экстрагирования pH вытяжки корректируют раствором гидроокиси калия (10 моль/дм3) до
3,5—4,0.
Для стабилизации аскорбиновой кислоты не рекомендуется применять растворы оксалатов, так
как их ионы ингибируют аскорбатоксидазу.
Разбавление пробы дистиллированной водой или метафосфорной кислотой проводят непосре
дственно перед определением. В этом случае нет необходимости в проведении корректировки pH до
3.5—4,0.
8.4.4 Медленно текущие реакции
Из практики применения метода следует, что оптическая плотность инкубационной смеси может
увеличиваться даже после окончания ферментативной реакции (возникает медленно текущая реакция). В
этом случае расчет значения конечной оптической плотности проводят экстраполированием на мо мент
внесения в инкубационную смесь рабочего раствора ФМС (см. 6.2.3).
Экстраполяцию проводят графическим способом или согласно следующей схеме: по истечении
15 мин после добавления в кюветы рабочего раствора ФМС (см. 6.2.3) проводят измерение оптической
плотности (А2), измерения повторяют каждые две минуты до тех пор. пока приращение AA/At не
будет принимать постоянные значения. Измерения останавливают идействительное значение конечной
опти ческой плотности инкубационной смеси на момент внесения рабочего раствора ФМС (см.
приложение А) рассчитывают по формуле
Л
/
л
\
Л
\
15
• Д
Л
/
ДГ
Л
П\
* A > = A2(’l5>-------
2
-----
(5)
Затем по формуле (1) рассчитывают значение разницы между значениями конечной и начальной
оптической плотности контроля и пробы.
8.5 Контроль ферментативного определения
Контроль определения осуществляют при необходимости проверки качества реактивов, оценки
уровня квалификации персонала лаборатории, осуществляющего анализ аскорбиновой кислоты, а так
же для выявления и устранения случайных и систематических ошибок определения.
8.5.1 Приготовление стандартного раствора аскорбиновой кислоты
Берут навеску в 200 мг аскорбиновой кислоты и количественно переносятее в мерную колбу вмес
тимостью 100 см3. Объем раствора в колбе доводят до метки метафосфорной кислотой (15 г/дм3), затем
тщательно перемешивают. Переносят 10 см3приготовленного раствора вдругую мерную колбу вмести
мостью 100 см3, затем доводят объем раствора до метки метафосфорной кислотой (15 г/дм3). Содержи
мое колбы тщательно перемешивают.
Стандартный раствор аскорбиновой кислоты стабилен в течение суток при температуре 20 °С, в
течение трех дней при температуре 4 =С и в течение одной недели при минус 20 °С. В схемах дозирова ния
и определения (таблицы 2. 3 и 4) допускается использовать в качестве внешнего стандарта только
свежеприготовленный стандартный раствор аскорбиновой кислоты.
8.5.2 Применение стандартного раствора аскорбиновой кислоты в качестве внутреннего
стандарта
Ферментативное определение с применением стандартного раствора аскорбиновой кислоты (см.
6.5.1) в качестве внутреннего стандарта проводят по следующей схеме дозирования (см. таблицу 4).
8