ГОСТ 31717—2012
указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпус кам
ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если ссылочный стан дарт
заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим
(измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на
него, применяется а части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Обозначения и сокращения
В настоящем стандарте применены следующие сокращения и обозначения:
МТТ — бромид 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2.5-дифенил-2Н-тетраэолия.
ФМС — переносчик электронов — феназинметосульфат.
МТТ — формазан — комплекс МТТ и формаэана,
АО — аскорбатоксидаза.
4 Сущность метода
Аскорбиновая кислота (витамин С) и другие редуцирующие вещества (х - Н2) восстанавливают
бромид 3-(4.5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенил-2Н-тетразолия (МТТ) вприсутствии переносчика элек
тронов феназинметосульфата (ФМС) при pH 3.5 до комплекса МТТ-формазана. Вкювете с пробой изме
ряют сумму редуцирующих веществ:
Аскорбиновая кислота (х- Н:)МТТ— —дегидроаскорбиноваякислота(х) ♦ МТТ-формазаи* Н \
Для обеспечения специфичного определения аскорбиновой кислоты вконтрольной кювете прово
дят окисление аналита аскорбатоксидазой (АО) в присутствии кислорода воздуха. Образующаяся де-
гидроаскорбиновая кислота не взаимодействует с МТТ и ФМС:
Аскорбиновая кислота +1/202—>двгидроаскорбиновая кислота * Н20.
Количествообразовавшегося комплекса МТТ-формазан, эквивалентное количеству аскорбиновой
кислоты в исходной пробе, определяют спектрофотометрическим измерением оптической плотности
исследуемого раствора пробы при длине волны 578 нм.
5 Отбор проб
5.1 Отбор проб — по ГОСТ 26313, подготовка проб — по ГОСТ 26671.
6 Проведение определения
6.1 Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
Гидроокись калия по ГОСТ 24363. ч. д. а. раствор молярной концентрации с (КОН) = 10 моль/дм3.
Поливинилполипирролидон (код пищевой добавки Е1202) с содержанием основного вещества не
менее 95 %.
Фосфорнокислый одиозамещенный 2-водный натрий. MaH2P04 2HzO по ГОСТ 245, ч. д. а.
Лимонная кислота моногидрат. C6Hs0 7 Н20. по ГОСТ 3652. ч. д. а.
Аскорбиновая кислота. C6HBOfi х. ч.
Формалин по ГОСТ 1625. раствор с объемной долей 5 %.
3-(4.5-диметилтиазол-2-ил)-2.5-дифенил-2Н-тетразолий бромид (МТТ) с содержанием основного
вещества не менее 95 %.
Феназинметосульфат (феназинУФМС) с содержанием основного вещества не менее 95 %.
Аскорбатоксидаза (сухой лиофилизат/АО), Е 1.10.3.3 с содержанием основного вещества не ме
нее 95 %.
Метафосфорная кислота. (НР04)„, по ГОСТ 841. раствор массовой концентрации 15 г/дм3.
Дистиллированная вода по ГОСТ 6709.
Спектрофотометр, позволяющий проводить измерения при длине волны578 нм. или фотометрфо
тоэлектрический с шириной спектральной полосы не более 10 нм идопустимой абсолютной погрешнос
тью измерений не более ± 1 %. или спектрофотометр на ртутной лампе, позволяющий проводить
измерения при 578 нм.
Кюветы из оптического стекла или полимерных материалов с длиной оптического пути 1 см.
Держатель для кювет.
Иономер или pH-метр с погрешностью измерения не более ± 0.05 pH.
2