ГОСТ 31717—2012
По формуле (1) рассчитывают разницу значений оптических плотностей для кювет «Проба ♦ стан
дарт (внутренний)». «Стандарт (внешний)» и «Проба». Степень повторного нахождения (ПН. %) для ас
корбиновой кислоты, содержащейся в стандартном растворе (см. 6.5.1), рассчитывают по формуле
I 1 H
_ 2 •проба «стандарт ~ Допрос»^ g j
\ А
-’^’стандарт
Ферментативное определение проведено безошибок, если степень повторного нахождения аскор
биновой кислоты находится в интервале от 95 % до 100 %.
Т а б л и ц а 4 — Схема дозирования и смешивания реактивов для ферментативного определения с использова
нием раствора аскорбиновой кислоты в качестве внешнего и внутреннего стандарта (8.5.2)
Дозируют в кювету
Контрольная
проба
Проба
Стандарт
(контроль!
Стандарт
(внешний)
Контроль
♦
стандарт
(внутренний)
Проба
стандарт
(внутренний)
Рабочий раствор МТТ
(см. 6.2.2)
1.000 см3
1.000 см3
1,000 см3
1.000 см3
1.000 см3
1.000 см3
Дистиллированная во
да
1,490"см3
(1,5002) см3)
1.490’’см3
(1.5001* см3)
1,490’>СМ3
(1.500*’ см3)
1,490’*СМ3
(1.S001* см3)
1.490" см3
(1,500** см3)
1.490"см3
(1.500» см1)
Проба (см. 6.3)
0.100 см3
0,100 см3
—
—
0.050 см3
0.050 см3
Стандартный
аскорбиновой
(см. 6.5.1)
раствор
кислоты
0,100 см30.100 см30.050 см30.050 см3
Рабочий раствор АО
(см. 6.2.4) или иммобили
зованная АО
0.0104 см*
(один шпа
тель1*)
0,010" см3
(один шпа
тель11)
0.010"см3
(один шпа
тель1’)
Рабочий раствор АО
(см. 6.2.4) или иммобили
зованная АО
0.010’>см3
—
(один шпа
тель1*)
0,010" см3
—
(один шпа
тель11)
0.010" см3
—
(один шпа
тель1’)
Перемешивают. Помещают кюветы в термостат при 37 ‘С. В течение 6 мин интенсивно перемешивают содер
жимое контрольных кювет с целью насыщения инкубационной смеси воздухом (необходимое условие полного
окисления аскорбиновой кислоты!). После выдержки измеряют значение начальной оптической плотности А1.
Продолжают реакцию добавлением:
Рабочий раствор ФМС
(см. 6.2.3)0.100 см30.100 см30,100 см30.100 см30.100 см30.100 см3
Перемешивают. Инкубируют (в темноте!) при температуре 37 °С в течение 15 мин, после чего немедленно из
меряют значение конечной оптической плотности Аг
’> При использовании рабочего раствора АО (см. 6.2.4).
2> При использовании иммобилизованного препарата АО (например, шпателя с иммобилизованной АО).
8.6 Граница чувствительности метода
Граница чувствительности метода составляет 0,30 мг/дм3 при ЛА = 0,015 (при 578 нм) и макси
мальном объеме пробы у в 1.490 (или 1,600) см3.
8.7 Линейность определения
Линейность определения сохраняется в интервале от 0,5 мкг аскорбиновой кислоты в кювете
(0.3 мг аскорбиновой кислоты/дм3пробы; объем пробы — v = 1,600 см3)до 20 мкгаскорбиновой кислоты
в кювете (0.2 г аскорбиновой кислоты/дм3пробы; объем пробы и= 0,100 см3).
9 Метрологические характеристики метода
В параллельном определении возможны различия между значениями оптических плотностей, ко
торые будут составлять от 0,005 до 0,010. Это соответствует объему пробы v = 0.100 см3и концентрации
аскорбиновой кислоты от 1,5 до 3 мг/дм3. При использовании в определении навески пробы в 1г/100 см3
(= 10 г/дм3) ожидаемые различия между параллельными определениями составят 0,015—0,030 г/100 г.
Метрологические характеристики метода приведены в приложении Б.
9