ГОСТ 31717—2012
значение для сохранения общего объема инкубационной смеси (2,70 см3) в кювете с неизменными кон
тролем ипробой. Увеличенный объем пробы необходимо приниматьво внимание при расчетеконечного
результата согласно формуле (3).
8.2 Специфичность определения
Метод специфичендля определенияобщей аскорбиновой кислоты, включающей D- и L-изомеры.
В анализе коммерческих препаратов аскорбиновой кислоты (например, витаминов) в свежеприго
товленных растворах можно ожидать, что степень повторного нахождения искомого вещества составит
94 %—100 %. На качество результатов определения степени повторного нахождения влияет срок хране
ния коммерческого препарата аскорбиновой кислоты и растворитель, используемый для получения рас
творов. Рекомендуется использовать раствор метафосфорной кислоты (см. 4.1) сдоведением pH пробы
до 3,5— 4,0.
На стабильность аскорбиновой кислоты вводных растворах сильно влияет присутствие ионов ме
таллов, напри мержелеза имеди, а также наличие впробе кислорода. Вэтом случаеожидаемая степень
повторного нахождения будет составлять менее 100 %. что обусловливается частичной потерей аскор
биновой кислоты.
С помощью настоящего ферментативного метода нельзя определить L-аскорбилпальмитат, так
как входе щелочного гидролиза происходит спонтанное разрушение свободной аскорбиновой кислоты.
8.3 Причины возможных ошибок при проведении определения
Сахароза, содержащаяся в соках и соковой продукции, не мешает определению, если ее концен
трация в кювете не превышает 30 мг.
Определению аскорбиновой кислоты мешает D-сорбит (при концентрации более 20 мг в кювете),
который ингибирует аскорбатоксидазу, а также этанол в высоких концентрациях, превышающих 100
мг/кювета. Влияние большинства мешающих факторов на результат определения исключается пу тем
увеличения длительности инкубации контрольной пробы с аскорбатоксидаэой до 10 мин.
Диоксид серы о высоких концентрациях, превышающих 50 мкг/кювета, взаимодействует с МТТ и
ФМС и вызывает тем самым медленно текущую реакцию. В этом случае пробу подвергают предвари
тельной обработке согласно 6.3.3.
Ионы металлов в концентрациях более 100 мкг/кювета могут понизить pH системы и. тем самым,
ингибировать действие аскорбатоксидазы.
Нитрит, который может содержаться внекоторых овощных соках, не мешает определению. Однако
его присутствие в системе может привести к спонтанному распаду аскорбиновой кислоты.
Ионы оксалата в концентрациях от 30 мкг/кювета способны оказывать значительное ингибирую
щее действие на аскорбатоксидазу. Высокую концентрацию оксалата устраняют путем добавления ио
нов кальция до концентрации 30 мкг/кювета и выше, а также созданием в системе слабокислой
среды (pH 5—6).
8.4 Выявление и устранение мешающих факторов при проведении анализа.
Контроль ферментативного определения
8.4.1 Общие указания
Если разницаоптических плотностей ДА менее 0,100, следует провести повторную подготовку про
бы к определению, увеличив ее навеску или уменьшив разбавление. Значение pH пробы влюбом опре
делении должно находиться в интервале от 3,5 до 4.0.
8.4.2 Операции с контрольной пробой
Содержимое кюветы с контрольной пробой интенсивно перемешивают стеклянной или пластико
вой палочкой (или шпателем с иммобилизованной АО2) в течение предварительной реакции.
После внесения рабочего раствора ФМС реакция проявляет повышенную чувствительность к све
ту. поэтому инкубирование при температуре 37 X необходимо проводить в полной темноте. Для чего
кюветы, находящиеся, например, в держателе, помещенном в водяной или воздушный термостат, на
крывают плотной светонепроницаемой тканью. Попадание света приводит к возникновению нежела
тельной медленно текущей реакции.
В случае медленно текущей реакции, вызванной попаданием света, значение оптической плотнос
ти А2системы определяют всоответствии с рекомендациями 6.4.5. Так как кюветы с пробой и контроль
ной пробой содержат одинаковый объем инкубационной смеси, медленно текущие реакции в них
идентичны. От экстраполяции в этом случае можно отказаться. Однако необходимо принимать во вни-
7