ГОСТ 31502—2012
градуированной пипеткой разливают по (11 ♦. 1) см3в подготовленные для определения чашки Петри по
ГОСТ 25336, установленные на горизонтальной поверхности.
Чашки Петри с засеянной смесью агаровой среды и суспензии спор допускается хранить в холо
дильнике при температуре (5 ± 1) °С не более 2 сут. Перед проведением определения чашки Петри про
гревают в термостате при температуре (55 ♦.1) ’С в течение (20 ». 1) мин.
5.1.1.5 Подготовка проб и приготовление обезжиренного стерильного молока
а) Подготовка проб
Определению на наличие антибиотиков подлежат пробы молока, давшие положительный резуль
тат по ГОСТ 23454 и отрицательный — по ГОСТ 24065, ГОСТ 24066. ГОСТ 24067. В стерильные пробир
ки пипеткой по ГОСТ 29227 отбирают по 5— 10 см3 анализируемой пробы молока, нагревают на водяной
бане при температуре (87 i 2) ’С в течение (10 ± 1) мин и охлаждают в холодной воде до температуры
18 °С — 25 °С.
б) Приготовление обезжиренного стерильного молока
Обезжиренное стерильное молоко получают из молока, предварительно проверенного на отсу
тствие ингибирующих веществ по ГОСТ 23454. с кислотностью 16—18 Т с применением сепарато ра-
сливкоотделителя. Обезжиренное молоко разливают в пробирки по 10 см3и стерилизуют при 101 кПа (1
атм) в течение (10 ± 1) мин.
5.1.1.6 Приготовление контрольного раствора стрептомицина
Контрольный раствор стрептомицина используют для проверкиактивности роста спор тест-культуры.
а) Приготовление фосфатных буферных растворов 1 и 2
Раствор 1: в мерной колбе вместимостью 1000 см3в небольшом количестве дистиллированной
воды растворяют 2,0 г двузамещенного фосфорнокислого калия по ГОСТ 2493 и 8,0 г однозамешенного
фосфорнокислого калия по ГОСТ 4198 и доводят объем дистиллированной водой до метки.
Устанавли вают pH раствора (6.1 i 0.1 )ед. pH с помощью растворов гидрата окиси калия по 3.39 или
соляной кисло ты по 3.40.
Раствор 2: в мерной колбе вместимостью 1000 см3в небольшом количестве дистиллированной
воды растворяют 16,73 гдвузамещенного фосфорнокислого калия и 0,523 г однозамещенного фосфор
нокислого калия и доводят объем дистиллированной водой до метки. Устанавливают pH раствора
(7,91 0,1) ед. pH с помощью растворов гидрата окиси калия или соляной кислоты.
Растворы стерилизуют при температуре (112 ♦ 2) °С в течение (30 ♦ 1) мин.
Срок хранения растворов в холодильнике при температуре (5
1
1) °С — не более 30 сут.
б) Приготовление основного раствора стрептомицина массовой концентрации 500 мкг/см3
(5 ± 1) мг стрептомицина растворяют в конической колбе вместимостью 25 см3в фосфатном бу
ферном растворе 1. Соотношение фактического значения массовой концентрации стрептомицина к
объему буферного раствора 1должно быть 1:100.
Пример — При массовой концентрации стандарта стрептомицина 760 мке/см3 5 ме антибиотика
(5 ме) растворяют в 7.6 см3буферного раствора 1. получив основной раствор массовой концентрации
500 мке/см3.
Срок хранения основного раствора стрептомицина в посуде из темного стекла с притертой пробкой
при температуре (5 ± 1) °С — не более 30 сут.
в) Приготовление контрольного раствора стрептомицина массовой концентрации 2,5 мкг/см3
Подготавливают три стерильные пробирки вместимостью 10 см3. В первую пробирку наливают
1см3 фосфатного буферного раствора 2 и 1см3основного раствора стрептомицина, во вторую — 9 см3
фосфатного буферного раствора 2 и 1см3раствора из первой пробирки, в третью — 9
см3стерильного обезжиренного молока по 5.1.1.5, б и 1 см3раствора из второй пробирки.
Массовая концентрация стрептомицина в разведениях составляет соответственно 250; 25 и
2.5 мкг/см3соответственно. Третье разведение массовой концентрации 2,5 мкг/см3является контроль
ным раствором.
Срок хранения контрольного раствора стрептомицина — не более 12 ч.
Допускается вместо контрольного раствора стрептомицина использовать предварительно восста
новленный по ГОСТ 23454 (аналогично) препарат СКИВ по 3.29.
5.1.2Проведение определения
5.1.2.1На поверхности агаровой среды, разлитой в чашки Петри по 5.1.1.4, пробойником по 3.14
или пробочным сверлом вырезают семь лунокдиаметром 10 мм (см. рисунок 1). Шесть лунок располага
ют поокружности чашки на равном расстоянии друготдруга и на расстоянии 28 мм их центров от центра
чашки. Седьмую лунку вырезают в центре чашки в случае использования контрольного раствора стреп
томицина.
5