ГОСТ 31502—2012
Применение конкретных видов оборудования, средств измерений, материалов и реактивов — в
соответствии с требованиями разделов 4 и 5.
Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, не уступаю
щихвышеуказанным по метрологическим итехническим характеристикам и обеспечивающих необходи
мую точность измерения, а также реактивов и материалов по качеству не хуже вышеуказанных.
4 Отбор и подготовка проб
Отбор и подготовка проб — по ГОСТ 3622. ГОСТ 26668. ГОСТ 26669. ГОСТ 26809 сдополнением. До
пускается хранить подготовленные пробы молока в холодильнике притемпературе (5 ± 1)°Сне более 24 ч.
5 Методы контроля
5.1 Чашечный метод с Bacillus stearothermophilus
Метод основан на способности антибиотиков, содержащихся в молоке, диффундировать в агаро
вую среду со спорами Bacillus stearothermophilus и препятствовать их росту, что приводит кобразованию
прозрачных зон имгибиции. Наличие антибиотиков в молоке устанавливают по размеру диаметра зоны
ингибиции.
5.1.1 Подготовка к определению
5.1.1.1 Подготовка лабораторной посуды — по ГОСТ ISO 7218.
5.1.1.2 Приготовление сред
Питательная среда: в мерной колбе по ГОСТ 1770 вместимостью 1000 см3в небольшом количес
тве дистиллированной воды по ГОСТ 6709 растворяют 10.0 г дрожжевого экстракта по 3.32. 20.0 г пепто
на по ГОСТ 13805. 0.5 г глюкозы по ГОСТ 975. доводят объем раствора дистиллированной водой до
метки и потенциометрическим анализатором по 3.7 устанавливают активность питательной среды
(7.1 1 0,1) ед. pH. Затем в необходимое количество конических колб по ГОСТ 25336 вместимостью 250
см3наливают по 200 см3приготовленной питательной среды и стерилизуют в стерилизаторе по 3.11 при
температуре (121 ± 2) °С в течение (15 ± 1) мин.
Срок хранения питательной среды в холодильнике при температуре (511) °С — не более 1 мес.
Агаровая среда: в мерную колбу по ГОСТ 1770 вместимостью 200 см3вносят 100 см3дистиллирован
ной воды, 1,0 г гидролизата кормовых дрожжей, 0.4 г пептона. 0,1 г хлористого натрия по ГОСТ4233 и 1.6 г
микробиологического агара поГОСТ 17206. перемешивают до полногорастворения инагревают наэлектро
плитке до кипения. Затемагаровую среду охлаждают до температуры (55 1 5) °С. устанавливают активность
агаровой среды (7,3 i 0,1) ед. pH и стерилизуют при температуре (121 ♦.2) °С в течение (1511) мин.
Срок хранения агаровой среды в холодильнике при температуре (5
1
1) °С — не более 1 мес.
Допускается применять среды промышленного изготовления, аналогичные указанным выше.
5.1.1.3 Получение спор тест-культуры
Питательную среду, подготовленную по 5.1.1.2. засеивают 2—3 см3тест-культуры N? 1 по 3.42, вы
ращенной в пробирках с этой же средой в течение 18—20 ч. тщательно перемешивают, помещают в тер
мостат и нагревают при температуре (5511) вС в течение 3 сут.
После окончания инкубации из посевов берут мазки, окрашивают их спиртовым раствором основ
ногофуксина по3.31 массовой концентрации 50 г/дм3и микросхопируют. При наличии в колбах с посева ми
90 % — 95 % свободных сформировавшихся спор колбы помещают в холодильник на 16—18 ч для
осаждения спор. Образовавшуюся надосадочную жидкость из колб сливают, а оставшийся осадок рас
пределяют по стерильным центрифужным пробиркам и прогревают на водяной бане при температуре
(67 ♦2) вС в течение (30 ♦1) мин. После этого пробирки помещают на центрифугу по 3.3 и центрифугиру ют
в течение 20—30 мин. Полученный осадок в каждой пробирке промывают дистиллированной водой (не
менее трех раз) до получения прозрачной жидкости над ним.
Взвесь спор повторно нагревают при температуре (67 ± 2) °С в течение (30 ♦ 1) мин и переносят в
пробирки.
Срок хранения спор тест-культур в холодильнике при температуре (5 ± 1) °С — не более 2 мес.
5.1.1.4 Приготовление засеянной агаровой среды
В пробирки отбирают взвесь спор тест-культуры, подготовленной по 5.1.1.3, и разводят дистилли
рованной водой до получения суспензии спор, визуально соответствующей 10 единицам по стандартно
му эталону мутности.
К 100 см3 расплавленной иохлажденнойдо температуры (60 ± 2) °С агаровой среды, подготовлен
ной по 5.1.1.2. добавляют 2.5 см340 %-ного водного раствора глюкозы и 4 см3суспензии спор, подготов
ленной, как указано выше. Смесь агаровой среды и суспензии спор тщательно перемешивают
и
4