ГОСТ
Р
55027—2012/lSOrrS 10272-3:2010
9.6Идентификация вида Campylobacterspp. (альтернативная процедура)
9.6.1 Общие положения
Из видов Campylobacterspp., произрастающих при температуре 41,5 °С. чаще всего встречаются
С. jejuni и С. coli. Вместе с тем были описаны другие виды (С. lari, С. upsaliensis и некоторые другие);
характеристики, приведенные втаблице 2. позволяют провести ихдифференциацию.
Т а б л и ц а 2 — Характеристики видов Campylobacter spp.
Характеристика
С. jejuniС. со»
С. lariС. upsaXensa
Каталаза (9.6.2)
♦+
♦
отрицательная или
в слабой форме
Налидиксовая кислота (9.6.3)
S*>S*>
R/SblS
Цефалотин (9.6.3)
RR
RS
Гидролиз гиппурата (9.6.4)
+с|
-
-
-
Индоксилацетвт (9.6.5)
++
-
Обозначения: ♦ = положительная; - = отрицательная; S = чувствительный; R = устойчивый.
в> Было обнаружено увеличение устойчивости к налидиксовой кислоте штаммов С. Jejuni и С. coll.
ь‘ Существуют одновременно чувствительные и устойчивые штаммы С. Ian.
с| Существуют гиппурат-отрицательныв штаммы С. jejuni.
9.6.2 Обнаружение каталазы
Для каждой колонии, отобранной всоответствии с 9.5.2.2, наносятпетлю культуры вкаплю раство
ра пероксида водорода (5.4.4) на чистом предметном стекле.
Испытание считается положительным, если втечение 30 с появляются пузырьки.
Подтверждают результаты, используя положительный и отрицательный контроль. Примерами
подходящих контрольных штаммов являются Staphylococcus aureus NCTC 8532 (положительный кон
троль) иEnterococcusfaecalis NCTC 775 (отрицательный контроль).
9.6.3 Определение чувствительности к налидиксовой кислоте и цефалотину
Для каждой колонии, отобранной всоответствии с Э.5.2.2. используют петлю (6.11) с целью приго
товления суспензии вбульонедля бруцелл (5.4.2) плотностью 0.5 по шкале Мак Фарланда.
Разбавляют суспензию всоотношении 1:10 тем же бульоном.
Заливают суспензией поверхностьслоя с 5 % (объемная доля) кровяного агара Мюллера-Хинтона
(5.4.6) .
Выдерживают втечение 5 мин. затем сливают избыток суспензии.
Высушивают чашки всушильном шкафу (6.2) при температуре 37 °С втечение 10 мин.
Помещают на поверхность агара диск с налидиксовой кислотой (5.4.7) и диск с цефалотином
(5.4.7) .
Инкубируют чашки крышками вверх при температуре 37 °С в течение (2212) ч в микроаэробной
атмосфере (6.14).
Интерпретируют результаты бактериального роста следующим образом:
- рост, который наблюдается при контактесдиском, классифицируется как устойчивый;
- при наличии зонылюбых размеров, обусловленной ингибированием роста, он классифицирует
ся как чувствительный.
9.6.4 Определение гидролиза гиппурата
Для каждой колонии, отобранной всоответствии
С9.5.2.2.
используют петлю(6.11)с большим коли
чеством инокулята с целью приготовления суспензии впробирке для гемолиза (6.7), содержащей 0.4 см3
раствора гиппурата натрия
(5.4.5),
при этом обращают особое внимание, чтобы исключить попадание
агара.
Встряхивают с целью тщательного перемешивания и инкубируют в течение 2 ч на водяной бане
(6.4) при температуре 37 °С или втечение 4 ч втермостате при 37 °С.
Осторожно добавляют 0,2 см3 раствора нингидрина (5.4.5) на поверхность раствора гиппурата
натрия. Избегают встряхивания.
Интерпретацию производят после дополнительного инкубирования в течение 10 мин на водяной
бане (6.4) при 37 °С или втермостате при 37 X .
Темно-фиолетовый цветсвидетельствует о положительной реакции.
6