ГОСТ Р 54055—2010
кой границей между ними. Осторожно вынимают пробку, ополаскивают ее и внутреннюю поверхность
шлифа с помощью примерно 5 см3 петролейного эфира так. чтобы он стекал в цилиндр. Отбирают как
можно больше верхнего эфирного слоя с помощью пипетки вместимостью 20 или 25 см3 и пере носят
через воронку с безводным сернокислым натрием в грушевидную колбу вместимостью 100 см3, в
которую предварительно добавляют несколько кристаллов бутилокситолуола (используют воронку
диаметром 56 мм идлиной 80 мм. в нижнюю часть носика которой помещают тампон из обезжиренной
стекловаты и насыпают безводный сернокислый натрий слоем высотой примерно 30 мм).
Растворитель из грушевидной колбы отгоняют под вакуумом на ротационном испарителе (перед
сбросом давления в кран впуска воздуха подают поток азота) и затем продувают потоком азота до пол
ного исчезновения запаха растворителя. Экстрагированные липиды хранят в плотно закрытой колбе в
холодильнике при температуре (6 ± 2) °С не более 24 ч. При необходимости более длительного хране ния
колбу с экстрагированным жиром хранят в морозильной камере при температуре не выше минус 12 °С
(срок хранения — не более одной недели).
На всех этапах подготовки пробы и экстракции жира необходимо предохранять пробу от прямого
попадания солнечных и ультрафиолетовых лучей.
7.7 Получение метиловых эфиров жирных кислот (метод внутреннего стандарта)
7.7.1 С помощью стеклянной палочки отбирают из колбы экстрагированные липиды (7.6.4), поме
щают их в предварительно взвешенную фторопластовую реакционную камеру автоклава или стеклян
ную виалу и взвешивают с записью результата взвешивания в миллиграммах до первого десятичного
знака (масса жира должна быть в пределах 40 — 50 мг). В реакционную камеру автоклава или виалу с
навеской липидов вносят 1 см3 раствора метилового эфира трикозановой кислоты и бутилокситолуола в
толуоле (см. 7.2). Перемешивают для растворения липидов и добавляют смесь, приготовленную по 7.1.
Реакционную камеру помещают в автоклав и закрывают крышкой (виалу плотно закрывают за
винчивающейся крышкой с фторопластовой прокладкой). Перед закрыванием емкостей их внутренний
объем продувают азотом. Автоклав (виалу) с пробой и смесью по 7.1 помещают в предварительно на
гретый до (60 ± 1) °С суховоздушный или жидкостной термостат и выдерживают при этой температуре в
течение (80 ± 2) мин, периодически перемешивая содержимое с интервалом примерно 15 мин.
7.7.2 После окончания термостатирования содержимое реакционной камеры или виалы перено
сят в пробирку вместимостью 25 см3[можно использовать пробирку, в которой готовилась реакционная
смесь (см. 7.1)]. В реакционную камеру или виалу вносят 3 см3 гексана, закрывают крышкой, энергично
встряхивают и смыв добавляют в пробирку. В пробирку добавляют 7 см3 водного раствора хлорида на
трия массовой долей 10 %. закрывают пробкой, энергично встряхивают с переворачиванием в течение
10 с и оставляют до полного разделения фаз. Верхнюю органическую фазу осторожно отбирают с по
мощью пипетки вместимостью 5 см3и пропускают через воронку с силикагелем и сернокислым натрием
(см. 7.3), предварительно промытой 3 — 4 см3 гексана (слой силикагеля в воронке должен все время
быть смоченным растворителем), собирая фильтрат в пробирку вместимостью 5 см3. После стекания
раствора метиловых эфиров из воронки в нее добавляют 2 см3 гексана и фильтрат собирают в эту же
пробирку. Окончательный объем раствора метиловых эфиров жирных кислот должен быть примерно 5
— 6 см3.
Срок хранения полученного раствора метиловых эфиров жирных кислот — 48 ч в холодильнике
при температуре (6 ± 2) °С.
7.8 Получение метиловых эфиров жирных кислот (метод внутренней нормализации)
Метиловые эфиры жирных кислот получают по 7.7 со следующим изменением в 7.7.1: в реак
ционную камеру или виалу с навеской липидов вместо раствора метилового эфира трикозановой
кислоты и бутилокситолуола в толуоле вносят 1 см3 раствора бутилокситолуола в толуоле, приготов
ленного по 7.3.
8 Проведение измерений
8.1В испаритель хроматографа вводят 1 мм3 раствора метиловых эфиров жирных кислот, при
готовленных по 7.7 (метод внутреннего стандарта) или по 7.8 (метод внутренней нормализации). Хро
матографирование проводят дважды. На полученной хроматограмме размечают все пики (кроме пика
бутилокситолола) и с помощью программного обеспечения определяют значения площадей пиков.
7