ГОСТ Р ИСО 10272-1—2010
8 Приготовление испытуемой пробы
Испытуемую пробу приготовляют в соответствии с конкретным стандартом на определенный вид
продукции. Если не существует конкретного стандарта, рекомендуется, чтобы заинтересованные сто
роны достигли соглашения по данному вопросу.
9 Методы проведения испытаний (см. приложение А)
9.1 Пробы, исходная суспензия и разбавления
Для приготовления исходной суспензии количество х порции пробы (масса или объем) вводят в
девятикратный объем обогатительной среды — бульон Болтона (5.2). с тем чтобы получить соотноше
ние проба/обогатительная среда 1:10 (масса/объем или объемУобъем). Гомогенизируют.
9.2 Обогащение
Исходную суспензию (9.1) инкубируют в аэробной атмосфере (6.14) при температуре 37 °С в тече
ние 4—6 ч. затем при температуре 41,5 °С в течение (44 * 4) ч.
9.3 Изоляция
9.3.1 Используя культуру, полученную в обогатительной среде (9.2), инокулируют стерильной пет
лей (6.11) поверхность первой селективной изолирующей среды, агара mCCD (5.3).
Аналогичным образом поступают со второй выбранной селективной изолирующей средой для
Campylobacter.
П р и м е ч а н и е — Предпочтительно выбрать вторую изолирующую среду, основанную на принципах, от
личных от агара mCCD. Примерами изолирующих сред, которые можно использовать, являются агар Skirrow. агар
Karmaii и агар Preston (см. библиографию).
9.3.2 Слои (9.3.1) инкубируют при температуре 41,5 °С в аэробной атмосфере (6.14).
9.3.3 После инкубации в течение (44 + 4) ч слои исследуют с целью выявления типичных и/или
подозрительных колоний Campylobacter.
Типичные колонии на агаре mCCD имеют сероватый цвет, часто с металлическим блеском, они
плоские и влажные и имеют тенденцию к разрастанию. Разрастание колоний менее выражено на более
сухих поверхностях агара. Возможно образование других форм колоний.
9.4 Подтверждение вида Campylobacter
9.4.1 Общие положения
Поскольку рассматриваемые бактерии быстро разрушаются на воздухе, необходимо незамедли
тельно следовать процедурам, описанным в 9.4.2 — 9.4.6.
9.4.2 Отбор колоний для подтверждения
9.4.2.1 Для подтверждения с каждого слоя каждой селективной среды (9.3.1) отбирают по мень
шей мере одну колонию, рассматриваемую в качестве типичной или подозрительной колонии Campy
lobacter. и еще четыре колонии, если первая дала отрицательный результат.
9.4 2.2 Производят посев каждой из отобранных колоний на слой колумбийского кровяного агара
(5.4.1). чтобы дать развиться четко изолированным колониям. Слои инкубируют в аэробной атмосфере
при температуре 41.5 °С в течение 24—48 ч. При исследовании морфологии, подвижности, аэробного
роста при температуре 25 °С. аэробного роста при температуре 41.5 °С и присутствия оксидазы следует
использовать чистые культуры.
9.4.3 Исследование морфологии и подвижности
9.4.3.1 Одну колонию со слоя колумбийского кровяного агара (Э.4.2.2) суспендируют в 1см3бульо
на Бруцелла (5.4.2) и исследуют морфологию и подвижность при помощи микроскопа (6.13).
9.4.3.2 Для дальнейшего исследования сохраняют все культуры (Э.4.2.2). в которых обнаружены
изогнутые палочки со спиральной «штопорообразной» подвижностью (9.4.3.1).
9.4.4 Исследование аэробного роста при температуре 25 °С
Используя колонии, изолированные по 9.4.2.2. инокулируют при помощи петли (6.11) поверхность
слоя колумбийского кровяного агара (5.4.1).
4