ГОСТ Р ИСО 10272-1—2010
Приложение В
(обязательное)
Состав и приготовление питательных срод и реактивов
В.1 Бульон Болтона
В.1.1 Базовая среда
В.1.1.1 Состав:
продукт ферментативного переваривания животных тканей — 10.0 г;
гидролизат лзктальбумина — 5.0 г:
дрожжевой экстракт — 5.0 г;
натрия хлорид — 5,0 г;
натрия пируват — 0.5 г;
натрия пиросульфит — 0.5 г;
натрия карбонат — 0.6 г;
а-кетоглутаровая кислота — 1.0 г;
гемин (раствор в 0.1 %-ном растворе натрия гидроксида)— 0,01 г;
вода — 1000 см3.
В.1.1.2 Приготовление
Базовые компоненты по В.1.1.1 или готовую обезвоженную среду растворяют в 1000 см3воды при слабом
нагреве.
Корректируют pH так. чтобы после стерилизации его значение для готовой среды составляло (7.4 ± 0.2) при
температуре 25 °С.
Среду разливают в колбы вместимостью 100—200 см3. Стерилизуют в автоклаве (6.1) при температуре
121 °С в течение 15 мин.
В.1.2 Стерильная лизированная дефибринированная кровь лошади
Используют кровь лошади, лизированную сапонином или замораживанием и последующим
размораживанием.
В.1.3 Антибиотический раствор
В.1.3.1 Состав:
цефопераэон — 0.02 г;
ванкомицин — 0,02 г;
триметоприма лактат — 0.02 г;
амфотерицин В — 0.01 г;
этанол/стерильная дистиллированная вода 50:50 (по обьему) — 5.0 см3.
В.1.3.2 Приготовление
Компоненты растворяют в смеси этанола и стерильной дистиллированной воды в соотношении 50:50.
В.1.4 Полная среда
В.1.4.1 Состав:
базовая среда (В.1.1)— 1000 см3;
стерильная лизированная дефибринированная кровь лошади (В.1.2)— 50 см3;
антибиотический раствор (В. 1.3) — 5 см3.
В.1.4.2 Приготовление
К базовой среде при температуре от 47 “С до 50 °С в стерильных условиях добавляют кровь, затем антибио
тический раствор и перемешивают. Соблюдая стерильность, среду разливают в пробирки или колбы (см. 9.1.2),
чтобы приготовить объем сред, необходимый для испытания. Если обогатительную среду приготовляют заранее,
ее надо хранить не более 4 ч при комнатной температуре или в темном месте при (3 ± 2) °С не более семи дней.
В.1.5 Эксплуатационное испытание
Эксплуатационные характеристики бульона Болтона необходимо испытывать в соответствии с методами и
критериями, описанными в ИСО 11133-2. Примерами подходящих контрольных штаммов являются Campylobacter
jejuni NCTC 11351 или АТСС1) 33291 со следующими критериями: > 10 колоний на модифицированном агаре с
углем, цефоперазоном и дезоксихолатом (mCCD) после инкубации в микроаэробных условиях при 41.5 ’С в тече ние
(44 г 4) ч.
В.2 Модифицированный агар с углем, цефоперазоном и дезоксихолатом (агар mCCD)
В.2.1 Базовая среда
В.2.1.1 Состав:
мясной экстракт — 10.0 г;
8
^Американская коллекция типовых культур (American Type Culture Collection. АТСС).