ГОСТ Р 53973—2010
Содержимое пробирки перемешивают и инкубируют в кипящей водяной бане 20 мин. Дальнейшие
операции осуществляют аналогично 4.5.1.4—4.5.1.5.
4.5.3 Определение оптической плотности «фона» субстрата
В пробирку вносят по 0.5 см3субстрата р-глюкана по 4.3.4. добавляют 0.5 см3дистиллированной
воды и 1 см3реактива Шомоди по 4.3.2. Содержимое пробирки перемешивают и инкубируют в кипящей
водяной бане 20 мин. Дальнейшие операции осуществляют аналогично 4.5.1.4—4.5.1.5. Показания
оптической плотности на субстрат обозначают D..
4.5.4 Определение оптической плотности «фона» фермента
В пробирку вносят 0.5 см3ацетатного буфера по 4.3.1 и 0.5 см3рабочего раствора фермента по
4.4.3, затем добавляют 1 см3реактива Шомоди по 4.3.2. Содержимое пробирки инкубируют в кипящей
водяной бане 20 мин. Дальнейшие операции осуществляют аналогично 4.5.1.4—4.5.1.5. Показания
оптической плотности на «фон» фермента обозначают как Da.
4.6 Обработка результатов
4.6.1Ферментативную активность р-глюканазы (Р-ГкС) в анализируемом образце в ед. |3-ГкС/r или
ед. р-ГкС/см3вычисляют по формуле
рГкС = К ДО л -2.78 d.(1)
где К — величина по 4.3.6;
д£> = Оф- О с- 0 о;
п — масса ферментного препарата, взятая на гидролиз (расчет ведется на 1см3рабочего раствора
анализируемого образца ферментного препарата), г;
2.78 — коэффициент, учитывающий пятикратное разбавление рабочего раствора ферментного препа
рата непосредственно в реакционной смеси, время проведения ферментативной реакции
(10 мин) и молекулярный вес глюкозы (0,18016 мг/мкмоль). т. е. 5/10 -0.18016 = 2.78;
d — плотность ферментного препарата (для жидких препаратов) по ГОСТ 18481, г/см3.
4.6.2За окончательный результат принимают среднеарифметическое значение двух параллель
ных определений, выполненных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемос
ти (2).
Границы относительной погрешности 8 = 4 7 % (соответствуют значению относительной расши
ренной неопределенности U095 при коэффициенте охвата к = 2).
Результат анализа представляют в виде
X*. Дпри Р = 0.95.
где X — среднеарифметическое значение двух параллельных измерений, признанных приемлемыми,
ед. р-ГкС/г (ед. р-ГкС/см3);
д — границы абсолютной погрешности измерений, ед. р-ГкС/г (ед. р-ГкС/см3). вычисляют по форму
ле
Д = Х -8 0.01 или Д= 0.07.X.
Наименьшие разряды числовых значений результата измерения и численных показателей точ
ности должны быть одинаковы.
Значащих цифр численных показателей точности измерений должно быть не более двух.
4.7 Сходимость и воспроизводимость результатов
4.7.1 Результаты измерений, полученные в условиях повторяемости (сходимости), признаются
удовлетворительными, если выполняется условие приемлемости
|Х ,-Х 2| 50.01 г Х,(2)
где X, и Х2— результаты двух параллельных определений, полученные в условиях повторяемости,
р-ГкС/г или ед.
ед. р-ГкС/r или ед. р-ГкС/см3;
0.01 — коэффициент для пересчета процентов в абсолютные значения;
г— предел повторяемости (сходимости), равный 8 %;
X — среднеарифметическое значение двух параллельных определений, ед.
р-ГкС/см3анализируемого препарата.
7