ГОСТ Р 53973—2010
Т а б л и ц а1
Объем градуировочного раствора
глюкозы массовой концентрации
1мг/см*. см1
Объем буферного раствора молярной
концентрации 0.05 моль/дм’, см*
Массовая концентрация глюкозы в
рабочем растворе, мг/см’
0.10
4.90
0.02
0.20
4.80
0.04
0.30
4.70
0.06
0.40
4.60
0.08
0,50
4.50
0.10
Рабочие градуировочные растворы глюкозы готовят вдень построения градуировочного графика,
при этом берут по три параллельных разведения для приготовления каждой концентрации раствора
глюкозы.
4.3.6 Построение градуировочного графика
В каждуюиз параллелей, состоящей из пяти пробирок (16 * 150 мм), вносят впо 1см3рабочих гра
дуировочных растворов глюкозы различных концентраций в соответствии с таблицей 1. добавляют в
каждую пробирку по 1 см3реактива Шомоди, приготовленного по4.3.2. перемешивают и помещают про
бирки в кипящую водяную баню на 20 мин.
Пробирки охлаждают в холодной воде до температуры (20,0 ± 0.2) °С. добавляют по 1 см3реакти
ва Нельсона, приготовленного по4.3.3, содержимое перемешивают, инкубируют 10 мин при температу
ре (20.0
1
0.2) аС и вносят по 7 см3дистиллированной воды, доводя объем содержимого пробирки до
10 см3.
Одновременно готовят контрольную пробу на реактивы по 4.5.2. Оптические плотности растворов
глюкозы измеряют на фотоэлектроколориметре или спектрофотометре при длине световой волны Х
= 610 нм в кюветах с толщиной поглощающего светового слоя 10 мм в сравнении с контролем на
реактивы.
Для построения каждой точки градуировочного графика вычисляют среднеарифметическое зна
чение оптической плотности трех параллельных измерений.
По полученным среднеарифметическим значениям строят градуировочный график зависимости
оптической плотности (поглощения) от концентрации глюкозы (мг/см3). Рабочая зона градуировочного
графика лежит в пределах от 0,10 до 1.1 единицы оптической плотности.
На оси абсцисс X откладывают массовую концентрацию глюкозы С в мг/см3; на оси ординат
У — соответствующие значения оптической плотности D при X = 610 нм. На рисунке 1 приведен пример
градуировочного графика. Величина, характеризующая наклон градуировочной прямой и обратная
ее тангенсуугла наклона, составляет,
например 0,098 (1/tg = 0,098), чтоv
является коэффициентом К. вхо
дящим в формулу расчета р -глю-
каназной активности. Величина
коэффициента может меняться в
зависимости от приготовленных
реактивов Шомоди и Нельсона.
Таким образом, эта величина рав
на массовой концентрации глюко
зы на оси X при оптической
плотности на оси У, равной 1,0.
Градуировочныйграфик
строят каждый раз при приготовле
нии новых реактивов Шомоди и
Нельсона, а также при замене при
бора.
Рисунок 1
5