ГОСТ Р 53973—2010
П р и м е ч а н и е — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылоч
ных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства
по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному
указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соотве
тствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если
ссы лочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует
руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то
положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями: 3.1
гидролиз: Расщепление исходногосоединения на более простые вприсутствии молекул воды. 3.2
ферментативный гидролиз: Расщепление высокомолекулярных соединений при участии
катализаторов белковой природы — гидролитических ферментов (гидролаз, класс 3 [1]).
3.3 субстрат: Соединение или вещество, на которое воздействует данный фермент.
3.4 р-глюкан: Высокомолекулярное соединение, полимер, вкотором остатки глюкозы соединены
гликозидными связями; с водой образует коллоидные растворы.
3.5 системные названия ферментов: Названия, указывающие природу химической реакции,
катализируемой данным ферментом, в соответствии с современной классификацией (КФ), принятой
Международной комиссией по ферментам.
П р и м е ч а н и е — Системные названия ферментов.
В группу fi-D-гпюканвз эндодействия, катализирующих расщепление |?-0-глюканов, входит 6 ферментов:
- 1.4-(1.3:1.4)-{ЯЭ-глюкан-4-глюканогидролаза (КФ 3.2.1.4) [1] — эмдо-1,4-р-глюканаза (целлюлаза)— гидро
лизует |М.4-гликозидные связи в целлюлозе. (Илюканах зерна:
- 1.3-(1,3:1.4)-(Г-0-глюкан-3(4)-глюканогидролаза (КФ 3.2.1.6)— эндо-1,3-(1-глюканаза (ламинариназа) — ка
тализирует расщепление внутренних (1-1.3- или (V-1.4-связей в(i-D-глюканах;
- 1.3-(1-0-глюканглюканогидролаза (КФ 3.2.1.39) — эндо-1.3-1.4-(1-глю*:аназа (эндо-1,3-(1-глюканаза) — гидро
лизует преимущественно внутренние 1,3-р-гликозидные связи);
-1.3-1,4^-0-глюкан-4-глюканогидролаза (КФ 3.2.1.73) — лихеназа — гидролизует р-1.4-гликозидные связи в
р-О-глюканах. имеющих р-1,3- и р-1.4-связи;
- 1.6-р-0-глюканглюканогидролаза (КФ 3.2.1.75) — эндо-1.6-р-глюканаза — гидролизует р-1,6-связи внутри
1.6-(Ю-глюканов;
- 1.2-р-О-глюканглюканогидролаза(КФ3.2.1.71) — эндо-1,2-р-глюканаза — гидролизуетвнутренние
(
1
-
1
.
2
-гликозидные связи глюкана.
В группу р-О-глюканаз экзодействия входят ферменты р-О-глюкозидглюкогидролазы (КФ 3.22.1.21) — р-глю-
козидазы: целлобиоза. расщепляют последнюю с нередуцирующего концар-1.4-связь вр-О-глюкозидах, высвобож
дая p-D-глюкозу.
4 Метод определения ферментативной активностир-глюканазы
с субстратом р-глюкан
4.1 Характеристика метода
4.1.1 Метод основан на количественном определении редуцирующих (восстанавливающих) саха
ров. образующихся врезультатедействия фермента р-глюканазы нар-глюкан при температуре 50 СС.
4.1.2 За единицу р-глюканазной активности (1 ед. р-ГкС) принимают количество фермента, действу
ющего на р-глюкан. изячменя с высвобождением 1 мкмоля восстанавливающих сахаров (в глюкозном эк
виваленте). образующихся за 1 мин при стандартных условиях (температура 50 °С и значение pH 5.0).
4.1.3 Содержание редуцирующих сахаров, образующихся в результате ферментативной реакции,
определяют колориметрическим методом, основанным на взаимодействии сахаров с реактивом Шомо-
ди-Нельсоиа [2]. В результате этой реакции образуется соединение голубого цвета, интенсивность окрас
ки которого пропорциональна содержанию редуцирующих сахаров, образовавшихся в процессе
ферментативной реакции. Интенсивность окраски полученных растворов измеряют на фотоэлектроколо
риметре придлинесветовой волны610 нм; активность выражается вед. р-ГкС/r или см3испытуемого пре
парата.
4.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы, материалы
4.2.1Для определения р-глюканазной активности используют следующие средства измерений,
вспомогательное оборудование, лабораторную посуду, реактивы, материалы:
2