ГОСТР ИСО 21871—2010
5.4 Твердая селективная среда: агар с полимиксином, пируватом. яичным желтком,
маннитом и бромтимоловым синим (PEMBA) по (2)
5.4.1 Базовая среда
5.4.1.1 Состав
Ферментативный продукт переваривания казеина, г1.0
D-Маннит, г 10.0
Пируаат натрия, г 10.0
Сульфат магния (MgS04 7Н20.\), г0.1
Хлорид натрия, г2.0
Гидрофосфат динатрия (Na2HP04), г2.5
Дигидрофосфат калия (КН2Р 04), г0,25
Бромтимоловый синий, г0,12
Агар. г“* 9— 18
Вода, см3 940
В зависимости от прочности геля агара.
5.4.1.2 Приготовление
Компоненты или готовую обезвоженную базовую среду растворяют в колбе вместимостью 1дм3
воды, нагревают на слабом огне до кипения и кипятят 2—3 мин при постоянном перемешивании.
При необходимости корректируют pH так. чтобы после стерилизации он был равен 7,2 ± 0,2 при
температуре 25 °С.
Стерилизуют в автоклаве (6.1) при температуре 121 °С в течение 15 мин.
5.4.2 Раствор лолимиксина В сульфата
Готовят по 5.3.2.
5.4.3 Эмульсия яичного желтка
Используют свежие чистые куриные яйца с неповрежденной скорлупой. Яйца промывают в жид
ком моющем средстве, используя щетку. Ополаскивают в проточной воде, погружают в 70 %-ный (по
объему) раствор этилового спирта на 30 с и высушивают. Соблюдая стерильность, разбивают каждое
яйцо и отделяют желтокот белка путем многократного переноса желтка с одной половины яичной
скор лупы на другую. Желтки помещают в стерильный мерный цилиндр идобавляют четыре
объемные час ти стерильной воды. Соблюдая стерильность, переносят содержимое в колбудля
стерилизации (6.7) и интенсивно перемешивают.
Смесь нагревают в течение 2 ч на водяной бане (6.4) при температуре 47 СС. Затем оставляют на
18—24 ч при температуре (3 ± 2) °С для образования осадка.
Надосадочную эмульсию собирают в стерильных условиях.
Эмульсию можно хранить при температуре (3 ± 2) аС не более 72 ч.
Обе твердые селективные среды, описываемые в настоящем стандарте, были первоначально
приготовлены из 20 %-ной эмульсии яичного желтка, как это изложено в (3). Допускается использовать
готовые эмульсии яичного желтка с различной концентрацией. Вместо с тем необходимо следовать
инструкциям производителя, особенно касающихся времени хранения. Следует принять меры для
обеспечения того, чтобы данная эмульсия была пригодна для использования в питательных средах,
описанных в 5.4 и 5.5.
5.4.4 Готовая среда (агар PEMBA)
5.4.4.1 Состав
Базовая среда (5.4.1). см3940
Раствор лолимиксина В сульфата (5.4.2), см3 10
Эмульсия яичного желтка (5.4.3), см3 50
5.4.4.2 Приготовление
В базовую среду (5.4.1). расплавленную иохлажденную до температуры 47 °С. добавляютдругие
компоненты раздельно при непрерывном перемешивании.
5.4.4.3 Приготовление чашек Петри с агаром
Переносят около 12,5 см3аликвоты полной среды в чашки Петри (6.9) и дают им затвердеть.
П р и м е ч а н и е — Ввиду технических причин (2), вместо обычного количества 15 см3используют 12,5 см3.
Чашки можно хранить при температуре (3 ♦2) °С до четырех дней.
4