ГОСТР ИСО 21871—2010
8 Приготовление анализируемой пробы
Анализируемую пробу приготовляют в соответствии с ИСО 6887 или ИСО 8261 или конкретным
стандартом, распространяющимся на конкретный продукт. Допускается в случав отсутствия конкретно го
стандарта, чтобы заинтересованные стороны достигли согласия по процедуре отбора проб.
9 Методика проведения испытания
9.1 Метод подсчета
9.1.1 Анализируемая проба, исходная суспензия и порядок разбавления разведения — по
ИСО 6887. в зависимости от конкретного продукта, или ИСО 8261.
П р и м е ч а н и е — Для подсчета только лрезумптивных бактерий Bacillus cereus исходное разбавление мо
жет быть нагрето на водяной бане (6.4) при температуре 80 ‘С в течение 10 мин.
9.1.2 Инокуляция и инкубация
Инокулируюттри пробирки, каждая из которых содержит среду двойной концентрации [5.3.1.1 а)],
в каждую добавляют по 10 см3исходного разбавления (начальная суспензия) (равной 1 г пробы в каж
дой пробирке) и перемешивают пробы со средой при помощи перемешивающего устройства для
про бирок (6.8).
Ииокулируют три пробирки, каждая из которых содержит среду единичной концентрации
[5.3.1.1 Ь)]. 1см3 в каждую пробирку исходного разбавления (начальная суспензия) (равной 0,1 г пробы в
каждой пробирке) или последующихразбавлений (равных0.01 г, 0.001 г и т.д. пробы в каждой пробир ке)
и перемешивают пробы со средой при помощи перемешивающего устройства для пробирок (6.8).
Инкубируют пробирки в термостате (6.3) при температуре 30 4С в течение (48 х 4) ч.
9.1.3 Выделение чистой культуры
После тщательного перемешивания с использованием перемешивающего устройства для проби
рок (6.8) делают посев культуры инокуляционной петли петлей из каждой пробирки на поверхность ага
ра с полимиксмном. пируватом. яичным желтком, маннитом ибромтимольным синим (PEMBA) (5.4) или
агара с маннитом, яичным желтком и полимиксином (МУР) (5.5).
Инкубируют чашки Петри с питательной средой крышками вниз при температуре 37 еС (PEMBA)
или 30 °С (МУР) 18—24 ч. Если колонии нельзя четко определить, продолжают выращивание в термос
татах дополнительно в течение 24 ч. При использовании агара PEMBA, дальнейшая инкубация
может быть продолжена при комнатной температуре.
9.1.4 Отбор чашек Петри
9.1.4.1 Общие положения
После завершения инкубации чашки Петри исследуют на наличие типичных или атипичных
колоний.
9.1.4.2 Типичные колонии
На PEMBA типичные колонии лрезумптивных бактерий Bacillus cereus с размерами от 2 до 5 мм
имеют неровные края с зазубринами и разветвлениями на гладкой стеклянной поверхности, имеют
цвет от бирюзовогодо голубого (допускается беловато-серый цвет в центре колонии с синим фоном) и
имеют ореол осадка (реакция на яичный желток) шириной до 5 мм.
На МУР типичные колонии имеют размеры от 2 до 5 мм и имеют зазубрины. Они обладают розо
вой окраской, темно-красным фоном иокружены ореолом осадка (реакция на яичный желток) шириной
до 5 мм.
9.1.4.3 Атипичные колонии
Если на чашках Петри имеется неоднородный рост бактерий, которые ферментируют маннит,
характерная окраска колоний и фон могут быть ослаблены или стать невидимыми.
Некоторые штаммы лрезумптивных бактерий Bacillus cereus обладают слабой реакцией на яич
ный желток или не обладают никакой реакцией. В подобных случаях и в других сомнительных случаях
такие колонии подлежат дополнительной проверке.
9.1.5 Подтверждение
9.1.5.1 Общие положения
Типичные колонии (9.1.4.2) и атипичные колонии (9.1.4.3) на PEMBA или МУР должны быть под
тверждены посредством испытания с помощью гемолиза на агаре с бараньей кровью. В качестве аль
тернативы типичные колонии на среде PEMBA или среде МУР проверяют с использованием
микроскопа.
8